面粉中BPO添加量的調(diào)查及其對小鼠肝、腎組織損傷作用的研究.pdf

1、【目的】:
　　 過氧化苯甲酰(Benzoyl Peroxide，BPO)具有強(qiáng)氧化性，不僅可以使面粉增白，還加快面粉的熟化及提高小麥的出粉率，同時分解釋放苯甲酸防止面粉霉變，所以經(jīng)常在面粉生產(chǎn)中添加使用。目前市售面粉普遍添加BPO，且超標(biāo)現(xiàn)象嚴(yán)重。BPO在面粉食用過程中，能否加重肝、腎負(fù)擔(dān)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確的測定面粉中BPO的高效液相色譜-紫外檢測法，對濟(jì)南市售面粉中BPO的添加量進(jìn)行調(diào)查。

2、并通過灌胃方式給予小鼠不同劑量的BPO，探討B(tài)PO對小鼠肝、腎組織的損傷作用。
　　 【方法】:
　　 1面粉中BPO含量測定的方法學(xué)研究
　　 采用高效液相色譜-紫外檢測法測定面粉中BPO的含量。
　　 色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動相：20mmol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90:10，V/V)；流速：1.0ml/min；檢測波長：218nm；檢測溫

3、度：室溫；進(jìn)樣量：20μl。
　　 2濟(jì)南市售面粉中BPO添加量的調(diào)查
　　 2008年12月-2009年8月隨機(jī)從濟(jì)南市市場抽取銷售的面粉，共采集各類面粉53份，對面粉中BPO的添加量進(jìn)行測定。依據(jù)GB2760-2007，將面粉中BPO含量≤60mg/kg作為判定合格的標(biāo)準(zhǔn)。
　　 3 BPO對小鼠肝臟組織損傷作用的研究
　　 3.1 BPO對小鼠肝臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 取各組小鼠的肝

4、組織勻漿，測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，研究BPO對小鼠肝臟抗氧化系統(tǒng)的影響。
　　 3.2 BPO對小鼠肝臟ATP酶活力的影響
　　 取各組小鼠肝組織勻漿，測定Na+ K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase的活力，研究BPO對小鼠肝臟ATP酶活力的影響。
　　 3.3 BPO對小鼠肝臟組織中鈣、鎂、鋅元素含量的影響

5、　　 稱取各組小鼠肝臟組織，在微波消解儀中進(jìn)行消化后，用火焰原子吸收分光光度法測肝臟組織中鈣、鋅、鎂含量，觀察BPO對肝臟必需元素含量的影響。
　　 3.4 BPO對小鼠肝臟功能的影響
　　 3.4.1 BPO對小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響
　　 取各組小鼠的血清，測定總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)的含量，研究BPO對小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響。
　　 3.4.2 BPO對小鼠肝臟膽汁酸代

6、謝的影響
　　 取各組小鼠的血清，測定總膽汁酸(TBA)的含量，研究BPO對小鼠膽汁酸代謝的影響。
　　 3.4.3 BPO對小鼠肝臟血清酶類的影響
　　 取各組小鼠的血清，測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)的活力，研究BPO對小鼠血清酶類的影響。
　　 3.5 BPO對小鼠肝臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 取各組小鼠肝臟組織固定、制作石蠟組織切片、蘇木素-伊紅(H

7、E)染色，于顯微鏡下進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 4 BPO對小鼠腎臟組織損傷作用的研究
　　 4.1 BPO對小鼠腎臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 取各組小鼠的腎組織勻漿，測定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，研究BPO對小鼠腎臟抗氧化系統(tǒng)的損傷。
　　 4.2 BPO對小鼠腎臟組織中ATP酶的影響
　　 取各組小鼠腎組織勻漿，測定Na+ K+-ATPase、Ca2+-ATPase、

8、Mg2+-ATPase的活力，研究BPO對小鼠腎臟ATP酶活力的影響。
　　 4.3 BPO對小鼠腎臟組織中鈣、鋅、鎂元素含量的影響
　　 稱取各組小鼠腎臟組織，在微波消解儀中進(jìn)行消化后，用火焰原子吸收分光光度法測腎臟組織中鈣、鋅、鎂含量，研究BPO對小鼠腎臟必需元素含量的影響。
　　 4.4 BPO對小鼠腎臟功能的影響
　　 測定各組小鼠血清中肌酐(CRE)和尿素的含量，研究BPO對小鼠腎臟功能的影響。

9、
　　 4.5 BPO對小鼠腎臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 取各組小鼠腎臟組織固定、制作石蠟組織切片、蘇木素-伊紅(HE)染色，于顯微鏡下進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 【結(jié)果】:
　　 1面粉中BPO含量測定的方法學(xué)研究
　　 取處理后的BPO標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)光譜掃描，本實(shí)驗(yàn)選用218nm為檢測波長。BPO在本實(shí)驗(yàn)條件中的保留時間為13.8min，在1-10μg/ml范圍內(nèi)線性良好(r=0.99991)，最低

10、檢出限(S/N=3)為0.2μg/ml，加標(biāo)回收率98.1-101.7％，日內(nèi)精密度RSD均小于2.98％，日間精密度RSD均小于3.14％。
　　 2濟(jì)南市售面粉中BPO添加量的調(diào)查
　　 檢測53份樣品，過氧化苯甲酰合格的35份(檢測值0-59.2mg/kg)，合格率為66.0％；超標(biāo)的18份(檢測值68.6-284.6mg/kg)，超標(biāo)率為34.0％。其中山東省與外省生產(chǎn)的面粉超標(biāo)率分別為33.3％和36.4％，兩

11、者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。其中特制粉（包括特一粉、特二粉、特精粉、精制粉）與普通面粉超標(biāo)率分別為36.8％和32.4％，兩者相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3 BPo對小鼠肝臟組織損傷作用的研究
　　 3.1 BPO對小鼠肝臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 中、高BPO染毒劑量組小鼠肝組織中SOD活力明顯低于對照組(P＜0.05，P＜0.01)；BPO染毒組MDA含量有所升高，且高劑量組與對

12、照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BPO各染毒組與對照組比較，小鼠肝組織中GSH-Px活力均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.2 BPO對小鼠肝臟ATP酶活力的影響
　　 BPO染毒組小鼠肝組織中Mg2+-ATP酶活力下降，且高劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組Ca2+-ATP酶活力與對照組比較明顯降低（P＜0．05），其余劑量組與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；BPO染毒組

13、Na+K+-ATP活力與對照比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.3 BPO對小鼠肝臟組織中鈣、鎂、鋅元素含量的影響
　　 與對照組比較，BPO染毒組小鼠肝組織中鈣的含量降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；與對照組比較，BPO染毒組小鼠肝組織中鋅、鎂的含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　 3.4 BPO對小鼠肝臟功能的影響
　　 3.4.1 BPO對小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響
　　

14、 BPO染毒組小鼠血清中TP、ALB含量降低，且高劑量組與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；BPO染毒組小鼠血清中GLO含量與對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.4.2 BPO對小鼠肝臟總膽汁酸代謝的影響
　　 BPO染毒組小鼠血清中TBA含量升高，且高劑量組與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3.4.3 BPO對小鼠肝臟血清酶類的影響
　　 ALT含量隨BPO

15、染毒劑量增加先升高后降低，且中劑量組與對照組比較顯著升高(P＜0.05)。BPO各染毒組AST、ALP含量，與對照組比較均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.5 BPO對小鼠肝臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 BPO染毒組鏡下可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤，并出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死、溶解。
　　 4 BPO對小鼠腎臟組織損傷作用的研究
　　 4.1 BPO對小鼠腎臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 與對照組相比

16、，BPO染毒高劑量組小鼠腎組織中SOD活性顯著降低，而MDA含量顯著升高(P＜0.05)。其余劑量組SOD活性、MDA含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 4.2 BPO對小鼠腎臟組織中ATP酶的影響
　　 BPO染量組Na+K+-ATP酶活力升高，且與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；BPO染毒組Mg2+-ATP酶活力下降，與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；BPO染毒組Ca2+-

17、ATP酶活力降低，且高劑量組與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01）。
　　 4.3 BPO對小鼠腎臟組織中鈣、鋅、鎂元素含量的影響
　　 BPO染毒組小鼠腎組織中鈣、鋅、鎂元素的含量與對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 4.4 BPO對小鼠腎臟功能的影響
　　 BPO染毒組小鼠血清中尿素的含量增加，且高劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BPO染毒組小鼠血清中CRE的含量與

18、對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4.5 BPO對小鼠腎臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 顯微鏡下可見，BPO染毒造成小鼠腎小管不同程度的凝固性壞死現(xiàn)象。
　　 【結(jié)論】:
　　 1本研究建立的測定面粉中過氧化苯甲酰的高效液相色譜方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好、樣品制備簡便等優(yōu)點(diǎn)，能夠有效地分離、測定面粉中過氧化苯甲酰的含量。
　　 2濟(jì)南市場現(xiàn)售面粉中大都添加了增白劑BPO，且出