拉莫三嗪共混膠束經(jīng)鼻給藥治療難治性癲癇的研究.pdf

1、癲癇是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，起病突然，經(jīng)常造成意外傷害甚至威脅患者生命，我國每年新增癲癇病例約為50萬人，其中約四分之一為難治性癲癇。所謂難治性癲癇，是在診斷明確的前提下，應(yīng)用合適的抗癲癇藥物進(jìn)行合理、正規(guī)的治療，身體內(nèi)的血藥濃度達(dá)到了有效治療范圍，但癲癇的發(fā)病部位藥物濃度較低，未達(dá)到有效治療濃度，無法滿意地控制癲癇病。本課題將癲癇治療藥物拉莫三嗪制備成mPEG-PLA/TPGS共混膠束和mPEG-PLA單一膠束，對其制備工藝、體

2、外釋放行為、大鼠體內(nèi)血藥濃度、海馬部位藥物濃度以及給藥后的組織分布進(jìn)行了全面的研究。
　　本研究選用mPEG-PLA和TPGS為載體材料，采用溶劑揮發(fā)法制備拉莫三嗪 mPEG-PLA/TPGS共混膠束。以載藥量為主要評價指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察攪拌時間、攪拌溫度、攪拌速度、TPGS與mPEG-PLA比例、聚合物濃度、有機(jī)相與水相的比值以及投藥量對載藥量的影響，最終通過五因素四水平的正交實(shí)驗(yàn)確定拉莫三嗪mPEG-PLA/TPGS共混

3、膠束最佳制備工藝：精密稱取20 mg的mPEG-PLA和15 mg拉莫三嗪溶于3 ml甲醇中，攪拌使其完全溶解，此為有機(jī)相。精密稱取8 mg的TPGS溶于16 ml蒸餾水中，此為水相。然后在1200 rpm和35℃的攪拌條件下，將有機(jī)相溶液逐滴滴入盛有水相的圓底燒瓶中，繼續(xù)攪拌0.5 h，然后在35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，經(jīng)過濾制得膠束溶液。所得的共混膠束的平均載藥量為39.28％。為了做對比，本研究同時采用溶劑揮發(fā)法制備拉莫三嗪 m

4、PEG-PLA單一膠束，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察膠束制備過程中的攪拌時間、攪拌溫度、攪拌速度、旋蒸溫度、滴加速度、聚合物濃度、有機(jī)相與水相的比值以及投藥量對載藥膠束的載藥量的影響。最后進(jìn)行四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)，得到 mPEG-PLA單一膠束的最佳工藝為：精密稱取20 mg的mPEG-PLA和13 mg拉莫三嗪溶于2 ml甲醇中，攪拌使其完全溶解，此為有機(jī)相。然后在1250 rpm和35℃的攪拌條件下，將有機(jī)相溶液逐滴滴入盛有6 ml蒸餾水的

5、圓底燒瓶中，繼續(xù)攪拌1.5 h，然后在35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，經(jīng)過濾制得膠束溶液。所得的單一膠束的平均載藥量為36.44%。利用激光粒度測定儀考察mPEG-PLA共混膠束和mPEG-PLA/TPGS單一膠束的平均粒徑分別為183.5 nm和122.9 nm。體外釋放結(jié)果表明拉莫三嗪mPEG-PLA/TPGS共混膠束和 mPEG-PLA單一膠束的體外釋藥行為符合雙指數(shù)雙相方程，說明二者的釋放分為兩個階段：先快速釋放后緩慢釋放，共混膠

6、束和單一膠束在12 h時累計(jì)釋放率分別為82%和89%。
　　為了研究載藥膠束經(jīng)鼻給藥后的藥代動力學(xué)特點(diǎn)，本研究建立了微透析采樣技術(shù)聯(lián)合反相高效液相色譜法來檢測拉莫三嗪載藥膠束經(jīng)鼻給藥后在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，測定拉莫三嗪共混膠束、拉莫三嗪單一膠束和拉莫三嗪藥物溶液經(jīng)鼻給藥后的血藥濃度經(jīng)時變化，采用 DAS3.1.1藥動學(xué)軟件計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)拉莫三嗪共混膠束與拉莫三嗪單一膠束相較于藥物溶液，血藥濃度可以在一段時間內(nèi)維持在一定

7、濃度，起到了緩慢釋藥的作用，其中共混膠束的達(dá)峰時間比單一膠束快7.5 min、峰濃度比單一膠束高0.06μg·mL-1，共混膠束的AUC0-∞分別是單一膠束的1.50倍、藥物溶液的4.27倍。
　　同時，本研究還建立了微透析采樣技術(shù)聯(lián)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS）檢測拉莫三嗪載藥膠束經(jīng)鼻給藥后在大鼠海馬部位的濃度，測定拉莫三嗪共混膠束、拉莫三嗪單一膠束和拉莫三嗪藥物溶液經(jīng)鼻給藥后的海馬藥物濃度經(jīng)時變化，采用 DAS3

8、.1.1藥動學(xué)軟件計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)拉莫三嗪共混膠束與拉莫三嗪單一膠束相較于藥物溶液，大鼠海馬部位的濃度可以在一定時間段內(nèi)維持在一定濃度，起到了緩慢釋藥的作用，其中共混膠束的達(dá)峰時間為7.5 min，比單一膠束快20 min、峰濃度比單一膠束高11.3 ng·mL-1，共混膠束AUC0-∞分別是單一膠束的1.78倍、藥物溶液的4.08倍。
　　最后，本研究建立了反相高效液相色譜法檢測拉莫三嗪在大鼠各組織濃度的方法，測定拉莫三