UGT基因多態(tài)性對癲癇患兒拉莫三嗪-丙戊酸相互作用的影響.pdf

1、目的
　　建立測定血清拉莫三嗪濃度的高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)，同時建立UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T的基因分型方法，探討UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T基因多態(tài)性對拉莫三嗪(lamotrigine，LTG)、丙戊酸(valproicacid,VPA)在中國癲癇患兒體

2、內(nèi)相互作用的影響。
　　方法
　　入選中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院就診的單用VPA、單用LTG、合用VPA和LTG的兒童癲癇患者，患兒年齡為2～18歲。收集癲癇患兒的血液樣本（穩(wěn)態(tài)谷濃度）、基本信息（性別、年齡、體重、身高）、用藥劑量、用藥時長、肝腎功能等。按照患兒所服用抗癲癇藥物類別，將患兒分為單用VPA組、單用LTG組及LTG、VPA合用組。
　　建立測定LTG血清藥物濃度的高效液相色譜法，并測定單用LTG及LTG合并

3、VPA患兒體內(nèi)LTG血藥濃度;采用熒光偏振免疫方法測定單用VPA及LTG合并VPA患兒體內(nèi)丙戊酸血清藥物濃度。
　　采用經(jīng)典的酚-氯仿方法提取患兒基因組DNA，應用聚合酶鏈式反應-限制性片斷長度多態(tài)性(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)分析法和直接測序方法對入組患兒UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT

4、2B7802C＞T的基因型進行分析。應用多元線性回歸分析影響LTG濃度的因素，應用方差分析、獨立樣本T檢驗、卡方檢驗對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果
　　建立了測定LTG血清藥物濃度的HPLC方法并進行了方法確證，血清中LTG的線性范圍為0.50-30.00μg/mL，定量下限為0.50μg/mL。LTG/VPA合用組(160名)、單用LTG組（20名）的LTG濃度分別為5.92±3.52μg/mL、1.84±1.07μg/m

5、L(p＜0.001)，標準化血藥濃度CDRLTG分別為2.43±1.31μg/mLpermg/kg、1.01±0.66μg/mLpermg/kg(p＜0.001)。LTG/VPA合用組、單用VPA組（127名）的VPA濃度分別為66.22±21.46μg/mL、63.65±25.43μg/mL(p=0.364)，CDRVPA分別為4.43±2.07μg/mLpermg/kg、4.44±2.50μg/mLpermg/kg(p=0.963)

6、。
　　207名中國癲癇患兒UGT1A4142T＞G的等位基因頻率為83.4％(T)、16.6％(G);UGT2B7-161C＞T的等位基因頻率為62.5％(C)、37.5％(T);UGT2B7802C＞T的等位基因頻率為63.1％(C)、36.9％(T)。對LTG/VPA合用藥組LTG濃度進行多元線性回歸分析，發(fā)現(xiàn)LTG濃度(Y)與性別(X1)、年齡(X2)、LTG日劑量(X3)、VPA濃度(X4)、UGT1A4142T＞G基因

7、型(X5)存在良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為:Y=0.962X1-0.192X2+0.053X3+0.026X4+1.362X5-0.352，R2=0.609。
　　單用LTG組中UGT1A4142T＞G野生型(TT)與突變型（TG或GG）的LTG濃度分別為1.71±1.36μg/mL、1.95±0.81μg/mL(p=0.632)，CDRLTG分別為1.19±0.89μg/mLpermg/kg、0.87±0.37μg/mLper

8、mg/kg(p=0.343)。而在LTG/VPA合用藥組中，UGT1A4142T＞G突變型患兒的LTG濃度高于野生型，且有統(tǒng)計學意義（7.35±3.64μg/mLvs5.26±3.27μg/mL，p＜0.001），CDRLTG突變型亦高于野生型（3.05±1.69μg/mLpermg/kgvs2.14±0.96μg/mLpermg/kg，p＜0.001）。按患兒的VPA濃度將患兒分為三個亞組（低濃度:10-30μg/mL，中濃度:30-

9、50μg/mL，高濃度:50-125μg/mL），當VPA在高濃度范圍內(nèi)時，UGT1A4142T＞G突變型的LTG濃度高于野生型（7.18±3.69μg/mLvs5.60±3.36μg/mL，p=0.015）;CDRLTG突變型高于野生型(3.15±1.76μg/mLpermg/kgvs2.22±0.95μg/mLpermg/kg，p＜0.001)。當VPA在中等濃度范圍時，UGT1A4142T＞G突變型的LTG濃度高于野生型（7.98

10、±3.94μg/mLvs4.09±3.10μg/mL，p=0.020），而CDRLTG則無統(tǒng)計學差異。當VPA為高濃度且UGT1A4142T＞G為突變型時，LTG濃度及CDRLTG均高于VPA低、中濃度組中UGT1A4142T＞G野生型患者，且有統(tǒng)計學差異(p=0.025，p=0.003)。當VPA在低濃度范圍時，未發(fā)現(xiàn)UGT1A4142T＞G突變型與野生型患者間的LTG濃度及CDRLTG有統(tǒng)計學差異。在UGT1A4142T＞G分組的基

11、礎上考察年齡因素的影響，分為低年齡（2-6歲）、中年齡（6-9歲）、高年齡（9-18歲），結(jié)果顯示在高年齡組且UGT1A4142T＞G野生型、突變型的CDRLTG分別為2.42±1.13μg/mLpermg/kg、3.11±1.73μg/mLpermg/kg，均高于低、中年齡組中UGT1A4142T＞G野生型的CDRLTG（1.72±0.88μg/mLpermg/kg、1.74±0.64μg/mLpermg/kg），(p=0.003，0

12、.004，0.011，0.025)，但與低、中年齡組中UGT1A4142T＞G突變型的CDRLTG相比則無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論
　　本研究建立了測定LTG血清藥物濃度的HPLC方法，并測定了單用LTG及LTG/VPA合用患兒LTG血清藥物濃度。結(jié)果顯示，VPA能顯著抑制癲癇患兒LTG體內(nèi)代謝，LTG濃度升高;而LTG對VPA的血藥濃度無影響。UGT1A4142T＞G突變型使LTG濃度升高，UGT2B7-161C＞T和UGT

13、2B7802C＞T對LTG血藥濃度無影響。LTG聯(lián)合VPA時，LTG濃度與患兒性別、年齡、LTG日劑量、VPA濃度、UGT1A4142T＞G基因型相關(guān)。高年齡組兒童（9-18歲）或較高VPA濃度情況下，UGT1A4142T＞G突變型使LTG濃度升高，但單用LTG時，UGT1A4142T＞G基因型對LTG濃度無影響。本研究初步探討了LTG聯(lián)合使用VPA時，UGT1A4142T＞G基因多態(tài)性對癲癇兒童LTG體內(nèi)代謝的影響，為LTG的個體化治