殼聚糖酶產(chǎn)生菌的育種、發(fā)酵條件優(yōu)化和殼寡糖的酶解制備.pdf

1、本課利用實(shí)驗(yàn)室保藏的殼聚糖酶產(chǎn)生菌-煙曲霉CK(Aspergillus fumigatus CK)作為出發(fā)菌株，對(duì)菌種選育、發(fā)酵條件優(yōu)化和酶解條件進(jìn)行了深入地研究，方案和結(jié)果如下： 首先利用紫外線和60Co對(duì)煙曲霉進(jìn)行復(fù)合誘變處理并進(jìn)行抗分解代謝物篩選，以殼聚糖作為唯一氮源，葡萄糖作為碳源，同時(shí)葡萄糖作為抗分解代謝阻遏物，選育獲得一株抗分解代謝阻遏的高產(chǎn)突變株UC-19。起始菌株殼聚糖酶活是5.3U/mL，突變株UC-19殼聚糖

2、酶活達(dá)到14.6U/mL，比起始菌株提高了175％。 然后運(yùn)用響應(yīng)面分析對(duì)煙曲霉產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化，首先采用部分因子實(shí)驗(yàn)篩選出影響殼聚糖酶產(chǎn)量的顯著因子牛肉膏和CaCl2；然后利用最陡爬坡路徑逼近最大產(chǎn)酶區(qū)域。 最后應(yīng)用中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析確定突變株UC-19產(chǎn)殼聚糖酶的最佳培養(yǎng)基組成。經(jīng)過優(yōu)化，其最佳培養(yǎng)基組成為(％，w/v)：殼聚糖1.5、牛肉膏2.1、KH2PO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1、CaCl2

3、 0.4、tween-80 0.1，pH 5.5～6.0在此條件下發(fā)酵液中殼聚糖酶活可達(dá)44.24U/mL，比優(yōu)化前酶活(13.01 U/mL)提高了225％。 利用所產(chǎn)的殼聚糖酶進(jìn)行殼寡糖的生產(chǎn)，殼聚糖酶活約為18U/mL，殼聚糖和酶液的量比為1：3(g/v)，分別在60℃、65℃和70℃水浴下水解，研究了水解過程中還原糖量和A420色度值隨著水解時(shí)間的變化情況，得出最佳的水解條件為溫度為60℃，時(shí)間為100min，此時(shí)還原糖