β-甘露聚糖酶產(chǎn)生菌的選育及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、本論文以魔芋、番鬼芋、土壤、海水等從自然界采集到的樣品為實(shí)驗(yàn)材料，經(jīng)過富集培養(yǎng)、分離純化、選擇性平板分離，篩選出200株產(chǎn)β-甘露聚糖酶的菌株，再經(jīng)過平板水解圈初篩得到20株酶活較高的菌株，經(jīng)過搖瓶復(fù)篩，選出一株酶活最高的菌株(編號(hào)為C3)，其酶活為15.66U／mL。對(duì)C3進(jìn)行16S rDNA序列測定，并在互聯(lián)網(wǎng)上與其它菌株的相關(guān)序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)C3是一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。 對(duì)C3進(jìn)行

2、<'60>Co誘變，經(jīng)過分離、平板水解圈初篩和搖瓶復(fù)篩，得到一株酶活為31.89 U/mL的菌株(編號(hào)為N40)，其酶活是出發(fā)菌株的2.04倍。再對(duì)N40先后進(jìn)行了三次紫外誘變和篩選，但卻遺憾地沒有獲得酶活更高的菌株。 對(duì)N40菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)最佳產(chǎn)酶條件為：1.0％／瓜兒豆膠作碳源，0.5％NH<,4>CI+0.5％Tryptone作氮源，培養(yǎng)基其它組分為MgSO<,4>7H<,2>0.1[％],KH<,2>

3、PO<,4> 0.05％，Na<,2>HPO<,4> 0.05％，pH7．0，接種量為1％，發(fā)酵溫度為37℃，搖床轉(zhuǎn)速為160r／m，搖瓶裝液量為100mL(500mE三角瓶)。在此發(fā)酵條件下發(fā)酵24h，該菌產(chǎn)生的β-甘露聚糖酶活力為39.07U／mE，是優(yōu)化前的1.23倍。 對(duì)N40菌株所產(chǎn)的β-甘露聚糖酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，初步確定 了酶解反應(yīng)的最適溫度為60℃，最適pH值為7.0，具有較好的熱穩(wěn)定性，一定的酸