CBS上調P2X3受體表達參與腰椎間盤突出癥模型大鼠持續(xù)性痛覺高敏.pdf

1、目的:
　　1.探究P2X3受體在大鼠腰椎間盤突出誘導的神經病理性疼痛中的作用；
　　2.探討H2S信號分子在調節(jié)L5/L6背根神經節(jié)P2X3受體表達和功能中的作用特征。
　　方法:
　　1.采用200-220gSD雄性大鼠，取出自體尾椎的正常髓核組織，置于手術顯露后的腰5，6左側神經根處，建立腰椎間盤突出癥動物模型（LDH）。分別在術前1天，術后3，7，14，21，28和35天運用VFF（Von Frey fi

2、laments）及雙足平衡實驗（Weight Bearing）的方法來評測SD大鼠的行為學疼痛閾值反應。
　　2.運用逆行標記的熒光素（Dil）來標記支配后肢的L5/L6背根神經節(jié)（DRG）中、小神經元，運用鈣成像方法研究腰椎間盤突出癥（LDH）大鼠L5/L6 DRG神經元中ATP誘導的細胞內鈣信號反應及神經元的興奮性變化。
　　3.運用Western Blotting方法檢測LDH模型大鼠L5/L6 DRG神經元中內源性硫

3、化氫合酶CBS和CSE以及嘌呤受體P2XRs的蛋白表達情況。
　　4.運用免疫組織化學方法檢測LDH大鼠L5/L6 DRG神經元中CBS和P2X3R蛋白共表達情況。
　　結果:
　　1.自體尾椎髓核（NP）移植能夠顯著降低 LDH模型大鼠后肢的機械性疼痛閾值，并且這一現(xiàn)象是與L5/L6 DRG神經元中硫化氫合酶CBS蛋白的表達上調相關聯(lián)的。
　　2.與假手術組（Sham）相比，LDH組增加了L5/L6背根神經節(jié)（

4、DRG）中P2X3R的蛋白表達量，而P2X2R，P2X1R的蛋白表達量并沒有發(fā)生變化。
　　3.對LDH大鼠鞘內注射硫化氫合酶CBS抑制劑AOAA后，發(fā)現(xiàn)AOAA能夠顯著的翻轉LDH大鼠的疼痛閾值，并呈現(xiàn)劑量和時間上的依賴性。而作為對照，AOAA并不能夠對假手術組SD大鼠的疼痛閾值產生作用。
　　4.對LDH大鼠鞘內注射P2X3R的選擇性拮抗劑A-317491后，發(fā)現(xiàn)A-317491能夠顯著的翻轉LDH大鼠的疼痛閾值，并呈現(xiàn)

5、劑量和時間上的依賴性。
　　5.運用免疫組化的實驗方法檢測后發(fā)現(xiàn)硫化氫合酶CBS與P2X3R在L5/L6神經元中能夠共表達。而且運用Western Blotting的方法進行檢測后發(fā)現(xiàn)，連續(xù)給予LDH大鼠AOAA能夠顯著翻轉NP引起的L5/L6神經元中的P2X3R表達的上調。
　　6.全細胞膜片鉗記錄顯示，與Sham組相比，在LDH大鼠L5/L6 DRG上，NP能顯著增強ATP誘導的細胞內鈣信號。鞘內連續(xù)給與硫化氫合酶CBS

6、抑制劑AOAA后可以抑制LDH大鼠中ATP誘導的鈣信號變化。
　　7.通過單次或連續(xù)給與LDH大鼠足趾注射硫化氫合酶CBS抑制劑AOAA后，發(fā)現(xiàn)AOAA不能夠翻轉LDH大鼠的疼痛閾值，而且運用Western Blotting的方法進行檢測后發(fā)現(xiàn)，連續(xù)足趾給藥后大鼠L5/L6神經元中P2X3R表達未發(fā)生變化。
　　結論:
　　腰椎間盤突出癥模型（LDH）中髓核（NP）激活了內源性硫化氫（H2S）合酶CBS表達的上調，通過