酶法降低β-乳球蛋白含量的研究.pdf

1、本研究以本實(shí)驗(yàn)室自制的β-乳球蛋白為原料，以β-乳球蛋白改性及降低β-乳球蛋白含量為目標(biāo)，優(yōu)化了一種降解β-乳球蛋白的工藝，建立了一種針對(duì)檢測(cè)乳清小肽類物質(zhì)的凝膠電泳檢測(cè)方法，并通過該方法對(duì)β-乳球蛋白降解產(chǎn)生的分子量在10kD及以下的小肽進(jìn)行了定性檢測(cè)，研究共分三部分。
　　 試驗(yàn)一，由于聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)分析中，對(duì)小分子質(zhì)量多肽類樣品分析效果不佳，針對(duì)該技術(shù)在小分子乳清肽方面的實(shí)際應(yīng)用，比較了不同濃度的濃縮膠、分

2、離膠，控制電泳過程中的電壓電流，以及研究不同染色方法的差異。最后優(yōu)化建立了一種可用于快速檢測(cè)10kD及以下的小肽的Tricine-SDS-PAGE方法。
　　 試驗(yàn)二，針對(duì)β-乳球蛋白耐蛋白酶水解，單酶對(duì)其水解能力有限，水解度不高的問題，研究了堿性蛋白酶分別與木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶組合對(duì)β-乳球蛋白進(jìn)行雙酶解，以水解度(DH)和可溶性氮含量(TCA-SN)表征其反應(yīng)程度，確定堿性蛋白酶與木瓜蛋白酶為最佳酶解組合。通過正

3、交實(shí)驗(yàn)，確定組合最佳反應(yīng)條件為：酶活添加量為5310U/g的堿性蛋白酶先水解150min后，再加入酶活添加量為4500U/g的木瓜蛋白酶，反應(yīng)到180min時(shí)，水解度可達(dá)36.21％。結(jié)合論文第一章的Tricine-SDS-PAGE方法對(duì)β-乳球蛋白水解液進(jìn)行電泳分析，了解其降解規(guī)律。
　　 試驗(yàn)三，目前β-乳球蛋白改性技術(shù)鮮有聯(lián)合使用，本研究嘗試采用熱處理與試驗(yàn)二中摸索出的雙酶解反應(yīng)相結(jié)合，兩種改性技術(shù)聯(lián)合使用。先通過單因素實(shí)