茶花的安全性評價(jià)及茶黃素和茶籽黃酮苷對呼吸鏈酶作用機(jī)理的研究.pdf

1、茶花和茶籽包含許多功能成分,在食品、飲料、化妝品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。茶花具有多種生物功能,在中國民間用于除臭、護(hù)膚、化痰止咳。為了茶樹花相關(guān)產(chǎn)品的市場化,本研究對茶樹花安全性進(jìn)行了評價(jià)。急性毒性試驗(yàn)表明茶樹花提取物對試驗(yàn)動(dòng)物無影響,LD50＞12.0g/kgBW,屬實(shí)際無毒級(jí)。Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果都表明供試樣品無致突變作用。90天喂養(yǎng)試驗(yàn)證明茶樹花提取物對大鼠體重、食物利用率、血液學(xué),血

2、生化、臟體比和病理組織均無顯著影響,表明茶樹花提取物在測試劑量范圍內(nèi)是安全的。這為茶樹花相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和市場化奠定了基礎(chǔ)。
　　 茶黃素是紅茶中重要的多酚類物質(zhì),具有抗氧化、抗腫瘤等生物活性。本研究發(fā)現(xiàn)茶黃素四種常見單體(TF1,TF2A,TF2B,TF3)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對大腸桿菌呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、NDH-2和ATP合成酶具有抑制作用。所有供試樣品能夠抑制復(fù)合體Ⅰ和NDH-2的NADH氧化酶活性。TF3活性

3、最強(qiáng),是復(fù)合體Ⅰ的競爭性抑制劑,NDH-2的反競爭性抑制劑。此外,TF3能夠抑制復(fù)合體ⅠNADH-HAR還原酶活性,且為其反競爭性抑制劑。這表明TF3在復(fù)合體Ⅰ土不止有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。TF3能夠顯著抑制復(fù)合體Ⅰ、NDH-2和活體細(xì)胞的超氧化物產(chǎn)生,但這與其對酶的抑制作用無關(guān)。
　　 四種茶黃素單體和EGCG能夠不同程度的抑制大腸桿菌ATP的水解,這在細(xì)胞膜和純化的F1中都得到證實(shí)。相對于EGCG而言,茶黃素抑制質(zhì)子跨膜傳遞的能力更

4、強(qiáng)。
　　 利用分子對接技術(shù)對茶黃素四單體和EGCG進(jìn)行在線虛擬篩選,發(fā)現(xiàn)了許多新的潛在靶標(biāo)蛋白,這對指導(dǎo)未來的茶葉功能成分研究具有重要意義。
　　 本研究采用超臨界提取和LC-MS技術(shù)成功提取并鑒定了茶籽餅中兩種山奈酚黃酮苷,并對二者與對大腸桿菌復(fù)合體Ⅰ和ATP合酶的互作進(jìn)行了初步探討。研究表明萃取時(shí)間、壓力、溫度和夾帶劑乙醇濃度都能夠顯著影響目標(biāo)產(chǎn)物的得率。最佳超臨界提取工藝為萃取時(shí)間150 min,壓力20 Mpa

5、,溫度80℃,夾帶劑乙醇濃度60％。該條件下實(shí)際得率為1.4±0.4 mg/g,與預(yù)測值11.9 mg/g無顯著差異。兩種化合物經(jīng)LC-MS鑒定為山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基]-β-D-吡喃葡萄糖苷和山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃木糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基]-β-D-吡喃葡萄糖苷。然而,兩種化合物在較高濃度時(shí)(100μM)對大腸桿菌復(fù)合體Ⅰ和ATP合酶的活性均無影響,是否