茶花的安全性評價及茶黃素和茶籽黃酮苷對呼吸鏈酶作用機理的研究.pdf

1、茶花和茶籽包含許多功能成分,在食品、飲料、化妝品等領域具有廣闊的應用前景。茶花具有多種生物功能,在中國民間用于除臭、護膚、化痰止咳。為了茶樹花相關產品的市場化,本研究對茶樹花安全性進行了評價。急性毒性試驗表明茶樹花提取物對試驗動物無影響,LD50＞12.0g/kgBW,屬實際無毒級。Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結果都表明供試樣品無致突變作用。90天喂養(yǎng)試驗證明茶樹花提取物對大鼠體重、食物利用率、血液學,血

2、生化、臟體比和病理組織均無顯著影響,表明茶樹花提取物在測試劑量范圍內是安全的。這為茶樹花相關產品的研發(fā)和市場化奠定了基礎。
　　 茶黃素是紅茶中重要的多酚類物質,具有抗氧化、抗腫瘤等生物活性。本研究發(fā)現(xiàn)茶黃素四種常見單體(TF1,TF2A,TF2B,TF3)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對大腸桿菌呼吸鏈復合體Ⅰ、NDH-2和ATP合成酶具有抑制作用。所有供試樣品能夠抑制復合體Ⅰ和NDH-2的NADH氧化酶活性。TF3活性

3、最強,是復合體Ⅰ的競爭性抑制劑,NDH-2的反競爭性抑制劑。此外,TF3能夠抑制復合體ⅠNADH-HAR還原酶活性,且為其反競爭性抑制劑。這表明TF3在復合體Ⅰ土不止有一個結合位點。TF3能夠顯著抑制復合體Ⅰ、NDH-2和活體細胞的超氧化物產生,但這與其對酶的抑制作用無關。
　　 四種茶黃素單體和EGCG能夠不同程度的抑制大腸桿菌ATP的水解,這在細胞膜和純化的F1中都得到證實。相對于EGCG而言,茶黃素抑制質子跨膜傳遞的能力更

4、強。
　　 利用分子對接技術對茶黃素四單體和EGCG進行在線虛擬篩選,發(fā)現(xiàn)了許多新的潛在靶標蛋白,這對指導未來的茶葉功能成分研究具有重要意義。
　　 本研究采用超臨界提取和LC-MS技術成功提取并鑒定了茶籽餅中兩種山奈酚黃酮苷,并對二者與對大腸桿菌復合體Ⅰ和ATP合酶的互作進行了初步探討。研究表明萃取時間、壓力、溫度和夾帶劑乙醇濃度都能夠顯著影響目標產物的得率。最佳超臨界提取工藝為萃取時間150 min,壓力20 Mpa

5、,溫度80℃,夾帶劑乙醇濃度60％。該條件下實際得率為1.4±0.4 mg/g,與預測值11.9 mg/g無顯著差異。兩種化合物經LC-MS鑒定為山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基]-β-D-吡喃葡萄糖苷和山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃木糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基]-β-D-吡喃葡萄糖苷。然而,兩種化合物在較高濃度時(100μM)對大腸桿菌復合體Ⅰ和ATP合酶的活性均無影響,是否