茶黃素和EGCG與抗壞血酸協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡機(jī)理研究.pdf

1、多酚類的抗氧化作用被認(rèn)為是茶葉防癌和抗癌最重要的作用機(jī)理。大量的生物體外、生物體內(nèi)研究和流行病學(xué)調(diào)查等都證實(shí)綠茶兒茶素具有良好的抗氧化功效。紅茶在世界上茶葉消費(fèi)量中占78％,茶黃素由綠茶多酚氧化聚合而來(lái),是紅茶的品質(zhì)元素。所以近年來(lái)茶黃素的研究成為茶葉研究的熱點(diǎn)。本研究采用體外和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)估了EGCG和TF3的抗氧化活性,研究了EGCG和TF3與維生素C對(duì)癌癥細(xì)胞的聯(lián)合作用效果并從MAPK途徑入手進(jìn)行了機(jī)理的探討。
　　 主要研

2、究結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)茶黃素單體(TF1、TF2A、TF2B和TF3)清除超氧陰離子自由基、單線態(tài)氧自由基、過氧化氫、羥自由基和DPPH自由基的能力進(jìn)行了研究,以EGCG為對(duì)照.結(jié)果表明,對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力為:TF1>TF2B>TF2A>TF3>EGCG；對(duì)單線態(tài)氧自由基的清除作用能力為:TF2B>TF1>TF3>TF2A>EGCG；對(duì)過氧化氫的清除作用為:TF2B=TF3>TF2A>TF1>EGCG；對(duì)羥自由基的

3、清除能力為:TF3>TF2B>TT2A>EGCG>TF1；對(duì)DPPH自由基的清除作用為:TF3≈EGCG>TF2A≈F2B>TF1。
　　 2.利用AM1法計(jì)算茶葉兒茶素的HOF值,并通過對(duì)物質(zhì)構(gòu)效關(guān)系和實(shí)驗(yàn)結(jié)果加以相互印證,提出了以HOF值來(lái)預(yù)測(cè)和表征茶葉中多酚類抗氧化能力的方法。對(duì)兒茶素的評(píng)估結(jié)果顯示EC、EGC、ECG和EGCG的HOF值分別為-213.58、-252.96、-322.44和-383.99,HOF值越低其抗

4、氧化性越強(qiáng),與實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果4種兒茶素的抗氧化活性的強(qiáng)弱順序相符合:EGCG>ECG>EGC>EC。TF1、TF3,EGCG和維生素C的HOF分別為-389.35、-654.13、-383.99和-232.18,從此可以看出抗氧化性最好的是TF3,另外TT1的抗氧化性可與EGCG媲美。
　　 3.采用Chou氏公式評(píng)估了EGCG和維生素C、TF3和維生素C的聯(lián)合抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)作用。結(jié)果表明,維生素C和TF3以1:10比率可以對(duì)

5、肺癌A549細(xì)胞產(chǎn)生拮抗作用和協(xié)同作用,在低抑制率時(shí)顯示拮抗作用,當(dāng)抑制率大于82.51％時(shí)顯示協(xié)同。維生素C與EGCG的聯(lián)合作用更為復(fù)雜,呈現(xiàn)波浪形效果,聯(lián)合抑制率小于49.8％時(shí)和抑制率大于80.3％時(shí)CI值呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。在協(xié)同抑制率為32.0％和65.6％之間時(shí)兩者為協(xié)同關(guān)系。維生素C與TF3、維生素C與EGCG以6:1的比率聯(lián)合抑制SPC-A-1細(xì)胞,分別當(dāng)聯(lián)合抑制率大于54.4％和45.5％時(shí)分別顯示協(xié)同效果.藥物處理SPC

6、-A—1細(xì)胞后G0／G1期的阻滯增加,其中TF3處理處于G0／G1期的最高,達(dá)到65.3％。處理TF3+Vc和EGCG+Vc后G0／G1期由53.9％分別增加到了62.8％和60.0％.其中TF3+Vc這一處理把S期由46.1％減少到23.8％,細(xì)胞的凋亡率由1.0％增加到了22.3％。說明TF3和Vc聯(lián)合對(duì)SPC-A-1癌細(xì)胞是從引起細(xì)胞周期阻滯和誘導(dǎo)凋亡兩方面作用的。
　　 4.在對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路的研究中發(fā)現(xiàn),TF3+Vc對(duì)S

7、PC-A-1細(xì)胞中的caspase3的活性為TF3單獨(dú)使用時(shí)caspase3活性的1.64倍；ECA-109細(xì)胞中EGCG+Vc處理的caspase3的活性顯著高于EGCG單獨(dú)使用時(shí)caspase3的活性,高達(dá)3.29倍；SPC-A-1細(xì)胞的caspase9活性檢測(cè)結(jié)果顯示,EGCG+Vc處理后caspase9的活性為EGCG單獨(dú)作用時(shí)的活性的2.90倍；EGCG+Vc處理和TF3+Vc處理后的ECA-109細(xì)胞caspase9活性分別