水母半胱氨酸蛋白酶抑制劑cDNA在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)及活性分析.pdf

1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cystatin)廣泛存在于動(dòng)物和植物之中，具有木瓜蛋白酶的抑制活性。本文所研究的cystatinJ是來(lái)自水母(Cyaneacapillata)的一個(gè)半胱氨酸蛋白酶抑制劑，具有cystatin家族典型的功能域及保守的二級(jí)結(jié)構(gòu)。　　本研究用水母半胱氨酸蛋白酶抑制劑cystatinJcDNA轉(zhuǎn)化煙草(Nicotianatabacum)，獲得轉(zhuǎn)基因植株，研究cystatinJ在植物中是否具有抗蟲的作用?！　”狙芯繕?gòu)建

2、了cystatinJ的表達(dá)載體pZYS8，利用農(nóng)桿菌將pZYS8導(dǎo)入煙草，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了PCR，northernblot等分子生物學(xué)鑒定，檢測(cè)了轉(zhuǎn)基因植株蛋白粗提液對(duì)木瓜蛋白酶的抑制活性及其對(duì)昆蟲消化道蛋白酶的抑制作用。在16個(gè)PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因株系中，有10個(gè)株系通過(guò)northernblot檢測(cè)到cystatinJ基因的表達(dá)。以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)為底物，用紫外分光光度法，檢測(cè)到這10個(gè)株系均有木瓜蛋白酶的

3、抑制活性，其中4個(gè)株系抑制活性較高。本研究還發(fā)現(xiàn)，斜紋夜蛾腸道蛋白酶中有部分的半胱氨酸蛋白酶活性，轉(zhuǎn)基因煙草蛋白粗提物對(duì)這些蛋白酶也有一定的抑制作用。這些結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因煙草中表達(dá)的cystatinJ對(duì)木瓜蛋白酶具有一定的抑制作用，也能部分抑制斜紋夜蛾腸道蛋白酶活性?！　”狙芯康牧硪粋€(gè)工作，是用來(lái)自龍葵(Solanumamericanum)的蛋白酶抑制劑SaPIN2a和SaPIN2b的cDNA轉(zhuǎn)化畢赤酵母(Pichiapastori