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文檔簡(jiǎn)介
1、 本研究在大腸桿菌中表達(dá)了GST-SaPIN2b融合蛋白,嘗試得到具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì),并使用表達(dá)的融合蛋白制備SaPIN2b抗體。融合蛋白在大腸桿菌中大部分以包涵體的形式大量表達(dá),以融合蛋白作為抗原通過(guò)免疫兔子得到了抗體,經(jīng)過(guò)鑒定,抗體的專一性和效價(jià)都比較高。 本研究將SaPIN2a和SaPIN2b兩種cDNA分別在轉(zhuǎn)基因煙草中過(guò)量表達(dá),得到轉(zhuǎn)基因煙草。通過(guò)分子雜交和酶學(xué)分析發(fā)現(xiàn),異源表達(dá)的SaPIN2a和SaPIN2
2、b蛋白仍具有抑制劑活性。轉(zhuǎn)基因煙草的總蛋白粗提液比野生煙草總蛋白粗提液具有針對(duì)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶強(qiáng)得多的抑制活性,這表明這兩種蛋白都具有針對(duì)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力。本研究還用SaPIN2a和SaPIN2b轉(zhuǎn)基因煙草喂養(yǎng)斜紋夜蛾(Spodopteralitura),初步評(píng)估了這兩種基因的抗蟲能力。 本研究還構(gòu)建了SaPIN2b的RNA干涉載體,轉(zhuǎn)化龍葵,使轉(zhuǎn)基因龍葵中的SaPIN2b基因表達(dá)沉默,用以研究SaPIN2
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