重組中華鱘半胱氨酸蛋白酶抑制劑生理功能初探.pdf

1、本實驗室克隆了中華鱘的cystatincDNA并將其連接到真核表達載體pPICZαA上，隨后轉化到畢赤酶母GS115細胞中，使cystatincDNA整合到酵母染色體DNA上；此重組工程菌經(jīng)誘導培養(yǎng)可以獲得高表達的重組cystatin，為探討cystatin生理功能奠定了物質基礎。為了研究重組cystatin在水產品加工、疾病防治上的應用，對重組cystatin的生理功能進行了以下幾個方面的探索：　　1、重組中華鱘半胱氨酸蛋白酶抑制劑

2、的制備。通過Bradford法及凝膠薄層掃描測得重組cystatin的表達量為每升培養(yǎng)基215mg，約占培養(yǎng)基上清總蛋白量的76.3％?！　?、重組cystatin對魚糜中肌漿球蛋白(myosin)的保護作用，結果表明：添加重組cystatin可使肌漿球蛋白受內源性組織蛋白酶降解的作用得到有效緩解，說明cystatin對肌漿球蛋白具有保護作用。 3、重組cystatin對組織蛋白酶B(cathepsinB)的抑制作用，結果表明

3、，熒光強度與加入的重組cystatin的量成反比。由測到的數(shù)據(jù)得出cystatin對cathepsinB的抑制曲線為：y=-0.249x+6.2018，說明重組cystatin對組織蛋白酶有抑制活性。　　4、重組cystatin對水產致病菌的作用試驗。結果表明，重組cystatin對水產養(yǎng)殖常見病原菌嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)、銅綠假單胞菌(Pseudomon