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文檔簡介
1、蜘蛛絲是自然界具有最優(yōu)異力學(xué)性能的生物纖維,主要成分為蛛絲蛋白,但是難以大量生產(chǎn)或收集。利用基因工程手段可實現(xiàn)蛛絲蛋白基因轉(zhuǎn)入異源宿主中并表達。本實驗通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將蜘蛛牽絲蛋白基因真核表達載體pK-2S轉(zhuǎn)入美利奴細毛羊胎兒皮膚成纖維細胞中,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)入蛛絲蛋白基因的細胞株,通過DNA,RNA水平的檢測初步鑒定基因是否轉(zhuǎn)入細胞并表達,為培育能生產(chǎn)含有蛛絲蛋白羊毛的綿羊新品種奠定基礎(chǔ)。
本研究主要內(nèi)容包括:⑴以已發(fā)表的棒絡(luò)新婦
2、蛛cDNA片段為模板,人工合成擬蜘蛛牽絲蛋白基因單體(S),并獲得二聚體(2S)。⑵建立了新疆美利奴細毛羊胎兒成纖維細胞系,細胞形態(tài)觀察顯示細胞形態(tài)良好,生長曲線表明細胞增殖狀態(tài)較好,核型分析正常。⑶克隆了綿羊毛囊特異性表達啟動子Kap6.1,構(gòu)建表達載體pKap-EGFP并轉(zhuǎn)入細毛羊胎兒皮膚成纖維細胞中并表達綠色熒光蛋白,表明啟動子具有表達活性。⑷以pEGFP-N1為框架,將2S與綿羊毛囊特異性啟動子Kap6.1相連,構(gòu)建毛囊特異表達
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