人睪丸特異表達基因TDRG1 shRNA表達載體的構建及其表達.pdf

1、中圖分類號UDCIU3721610碩士學位論文學校代碼!Q墨三蘭密級公玨人睪丸特異表達基因TDRG1shRNA表達載體的構建及其表達ConstructionofTDRG1shRNAexpressionvectorandstudyontheinterferingeffectofTDRG1shRNAexpressionvectorinNTERA—2cells作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：彭圣林臨床醫(yī)學外科學湘雅三醫(yī)

2、院湯育新教授論文答辯日期善啪乙／答辯委員會主中南大學2013年5月人睪丸特異表達基因TDRGlshRNA表達載體的構建及其表i大還摘要：目的：構建靶向人睪丸基因TDRGl的shRNA重組質粒表達載體，并研究其在人惡性畸胎瘤細胞(NTERA2)I拘表達。篩選出高效且特異性抑制TDRGl基因表達的重組質粒表達載體，為下一步研究TDRGl基因對睪丸腫瘤生物學行為的作用奠定基礎。方法：設計合成有短發(fā)夾結構靶位TDRGl基因的寡核苷酸，經退火成雙

3、鏈，克隆至載體pGPU6／GFP／Neo中，構建了TDRGl一shRNA表達載體，得到重組質粒TDRGlshRNA486，TDRGlshRNA738，TDRGlshRNA921和一個陰性對照，轉化入JMl09大腸桿菌，抽提質粒，進行酶切和測序鑒定，分別使用LipofectamineTM2000介導轉染重組質粒shRNA至人惡性畸胎瘤細胞中，再應用RealTime—PCR法檢測轉染后人惡性畸胎瘤細胞TDRGlmRNA的表達水平。結果：酶切

4、結果表明，所有質粒均為陽性重組質粒，經基因測序證實，插入的DNA片段的序列與設計序列完全一致。同時篩選到轉染TDRGlshRNA486的人惡性畸胎瘤細胞TDRGl基因的mRNA表達水平明顯抑制(pO01)，并對TDRGl基因mRNA抑制效率為8489％。結論：成功構建了人睪丸特異性表達基因TDRGl的shRNA表達載體，三組TDRGl一shRNA均可在NTERA2細胞內成功表達，而其中TDRGlshRNA486抑制目的基因的效果最好。圖