轉(zhuǎn)基因系構(gòu)建斑馬魚(yú)胰島β細(xì)胞發(fā)育模型的建立.pdf

1、目的：本課題旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建活體的胰島β細(xì)胞綠色熒光可示蹤的斑馬魚(yú)系，從而為在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步破壞胰島β細(xì)胞，建立活體的胰島β細(xì)胞可示蹤的，可供高通量藥物篩選的糖尿病胰島β細(xì)胞破壞模型作出前期準(zhǔn)備。 方法：通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，PCR技術(shù)、分子克隆等方法，建立GFP標(biāo)記胰島B細(xì)胞的遺傳學(xué)轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)品系；活體呈像動(dòng)態(tài)示蹤胰島B細(xì)胞的起源和成熟；全胚胎原位雜交和基因組PCR證實(shí)GFP陽(yáng)性細(xì)胞與內(nèi)源性胰島B細(xì)胞共定位。 結(jié)果

2、：1.獲得INS部分啟動(dòng)子的克隆和重組質(zhì)粒INS：GFP，顯微鏡注射建立生殖系胰島素轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)。 2.通過(guò)生殖系轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)的篩選和熒光觀察，24hpf GFP標(biāo)記的胰腺β細(xì)胞群被探測(cè)到位于第二、三體節(jié)下方中線兩側(cè)的單一的橢圓形實(shí)體。隨著斑馬魚(yú)胚胎的發(fā)育，胰腺逐漸增大并向右遷移，72hpf可以觀察到胰腺β-細(xì)胞位于腹中線的右側(cè)。卵黃囊消失后，120hpf明顯看到胰腺右偏，同時(shí)下移到魚(yú)鰾下方的十二指腸背側(cè)。 3. 全基因