克百威殘留檢測(cè)免疫傳感器制備方法研究.pdf

1、克百威是一種高效廣譜氨基甲酸酯類殺蟲劑，廣泛應(yīng)用于防治農(nóng)作物病蟲害。但因使用不當(dāng)、濫用和生物鏈富集放大等因素，造成克百威殘留現(xiàn)象嚴(yán)重，嚴(yán)重影響人類健康和進(jìn)出口貿(mào)易。因此克百威殘留的檢測(cè)已日益引起廣大研究者的關(guān)注。免疫傳感器因其檢測(cè)快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn)，有希望實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。本文研究了免疫傳感器制備過(guò)程中的電極修飾材料及抗體固定方法，以電流為響應(yīng)信號(hào)測(cè)定了實(shí)際樣品中的克百威殘留。具體研究工作如下：
　　1.基于4

2、'4-硫代聯(lián)苯硫酚/電沉積納米金層層自組裝免疫傳感器的研究。利用4'4-硫代聯(lián)苯硫酚（DMDPSE）兩端的巰基以及其剛性結(jié)構(gòu)，巰基（-SH）一端通過(guò)金硫鍵連接裸金電極，巰基另一端通過(guò)金硫鍵連接電沉積納米金（DpAu），并通過(guò)層層自組裝的方法，構(gòu)建了一種高度有序的金硫（Au-S）體系。DpAu為抗體在電極表面的固定提供了一個(gè)良好的生物界面。經(jīng)過(guò)上述方法制備的免疫傳感器，其線性范圍為0.1ng/mL-1.0×106ng/mL，檢測(cè)限為0.0

3、6ng/mL（S/N=3）。
　　2.基于蛋白A/電沉積納米金修飾的免疫傳感器的研究。利用蛋白A可以和抗體的Fc端特異性結(jié)合來(lái)定向固定抗體，采用電沉積納米金（DpAu）可較好的改善電極性能和吸附蛋白A，以更有效的完成目標(biāo)成分克百威的檢測(cè)。與傳統(tǒng)的滴涂納米金膠的方法相比，DpAu在電極表面具有更好的穩(wěn)定性、均勻性，并且沉積過(guò)程簡(jiǎn)單、省時(shí)、可控。經(jīng)上述方法制備的免疫傳感器，檢測(cè)時(shí)間較短，靈敏度高，選擇性穩(wěn)定性好，再生能力好，回收率符合

4、要求。其線性范圍為1-100ng/mL和100ng/mL-10000μg/mL，檢測(cè)限為0.1924ng/mL（S/N=3）。
　　3.基于抗體定向固定共軛物和石墨烯納米復(fù)合物的免疫傳感器的研究。采用谷胱甘肽作為空間手臂將抗克百威的單克隆抗體定向共價(jià)固定到納米金膠表面，抗體的定向固定保持了抗體的生物活性以及自由的抗原結(jié)合位點(diǎn)來(lái)和農(nóng)藥有效的特異性結(jié)合，增強(qiáng)傳感器的檢測(cè)靈敏度。制備了一種新型納米材料石墨烯-聚乙烯亞胺-納米金（GS-P

5、EI-Au）納米復(fù)合材料，改善了石墨烯的水溶性、導(dǎo)電性以及穩(wěn)定性。采用多壁碳納米管（MWCNTs）和GS-PEI-Au兩種復(fù)合納米材料的協(xié)同作用共同修飾電極，顯著的增強(qiáng)了電流響應(yīng)。其線性范圍為0.5ng/mL到500ng/mL，檢測(cè)限為0.03ng/mL（S/N=3）。
　　4.對(duì)上述三種試驗(yàn)方案進(jìn)行比較，篩選出最佳免疫傳感器的制備方法。采用蛋白A定向固定法固定克百威抗體，采用多壁碳納米管和石墨烯納米復(fù)合材料（GS-PEI-Au）