糖皮質(zhì)激素多殘留免疫研究與量子點在免疫分析中的應(yīng)用.pdf

1、近年來，動物源食品中的獸藥殘留成為世界關(guān)注的焦點。獸藥的蓄積殘留對人類健康及環(huán)境均造成極大的威脅。免疫方法是快速、簡便、有效的檢測獸藥殘留的方法，多殘留的群選性及與新型納米材料的結(jié)合提高靈敏度已成為免疫方法研究的趨勢。本研究包括糖皮質(zhì)激素多殘留的免疫方法研究及量子點這種新型納米材料在免疫檢測應(yīng)用的研究這兩部分。
　　 糖皮質(zhì)激素多殘留免疫檢測方法:本文首先對地塞米松、倍他米松、雙氟米松琥珀酸酐化，然后分別與牛血清白蛋白、卵清蛋白

2、偶聯(lián)，制備三種免疫原和包被原，將得到的三種免疫原各免疫2只新西蘭大白兔制備抗血清，其中較好的抗血清效價分別高達345600、614400、307200，然后以效價較高的抗血清為基礎(chǔ)設(shè)計了間接競爭ELISA方法，并優(yōu)化了二抗稀釋比、競爭時間、PBS溶液的pH值等條件參數(shù)。優(yōu)化后的地塞米松、倍他米松、雙氟米松三種抗體的間接競爭ELISA曲線的IC50分別為2.66 ng/mL、7.36 ng/mL、6.12 ng/mL。通過三種抗體的交叉反

3、應(yīng)來評估其群選特性，結(jié)果表明地塞米松抗體的群選性最強，對雙氟米松的交叉反應(yīng)率高達120%，倍他米松73%、曲安息龍37%、潑尼松龍21%，而對幾種內(nèi)源性類糖皮質(zhì)激素交叉反應(yīng)率均小于0.1%，然后本研究以0.375、0.75、1.5、3 ng/mL四個濃度分別添加到雞肉樣本中測定添加回收率，所得回收率范圍在61%-80%之間，變異系數(shù)小于15%。在實際樣本檢測中，將ELISA方法的測定結(jié)果與LC-MS的結(jié)果進行比較，二者具有很好的相關(guān)性。

4、
　　 量子點在免疫分析中的應(yīng)用:本研究先用生物素化的變性BSA包裹五種不同粒徑的量子點并對其光學性質(zhì)進行了研究，然后用親和素作為橋，使它們分別與五種生物素化的抗體(地塞米松、醋酸甲羥孕酮、氯硝西泮、頭孢噻呋、慶大霉素)交聯(lián)，得到量子點-抗體的熒光標記物，標記物被用于熒光免疫檢測方法的建立，通過優(yōu)化條件，本實驗建立了一種簡便，快速，靈敏的熒光免疫檢測方法。地塞米松、慶大霉素、氯硝西泮、醋酸甲羥孕酮、頭孢噻呋五種抗體的檢測限可以分