CUL4A調(diào)控NF-κB信號通路在促進胃癌侵襲中的分子機制.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：416523613049南昌大學碩士研究生學位論文CUL4A調(diào)控調(diào)控NFκB信號通路在促進信號通路在促進胃癌侵襲中的分子機制胃癌侵襲中的分子機制LPSactivatesCUL4ANFκBsignalingtopromotegastriccancercellsinvasion公宇培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：熊建萍教授、主任醫(yī)師申請學位的學科門類：臨床醫(yī)學碩士學科專業(yè)名稱：腫瘤學論

2、文答辯日期：2016年6月答辯委員會主席：評閱人：2016年6月摘要II摘要目的：目的：探討CUL4A在炎癥促進胃癌侵襲性中影響，以及闡明CUL4A通過調(diào)控NFκB信號通路參與這一過程的分子機制。方法：方法：1、選擇HGC27胃癌細胞株，轉(zhuǎn)染CUL4AsiRNA以及轉(zhuǎn)染無義序列NC。在炎癥刺激物LPS的刺激下，采用細胞劃痕、Transwell實驗檢測四組胃癌細胞（NC、LPS、CUL4AsiRNA、LPSCUL4AsiRNA）的遷移及侵

3、襲能力。2、采用westernblot技術(shù)檢測LPS對CUL4A和NFκB蛋白刺激作用以及刺激的最佳時間和最適濃度。3、采用westernblot和RTPCR技術(shù)檢測CUL4AsiRNA對CUL4A蛋白及mRNA水平表達的抑制情況。在最佳時間和最適濃度LPS刺激下，采用westernblot技術(shù)檢測分別轉(zhuǎn)染CUL4AsiRNA和無義序列NC胃癌細胞的NFκB的蛋白表達情況和用RTPCR技術(shù)檢測NFκB信號通路下游炎癥因子的mRNA水平。

4、4、采用免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）和westernblot技術(shù)同時檢測CUL4A和NFκB蛋白在胃癌及癌旁組織標本中的表達的情況，并分析它們在胃癌組織中表達之間的相關(guān)性。結(jié)果：結(jié)果：1、細胞劃痕實驗及Transwell實驗結(jié)果表明，LPS能夠促進胃癌細胞的侵襲和遷移能力，但下調(diào)CUL4A則這一促進作用減弱。2、LPS能夠增強CUL4A和NFκB的蛋白表達，且最佳時間和最是濃度都分別是2h和100ng

5、mL。3、Westernblot和RTPCR結(jié)果表明，CUL4AsiRNA能夠有效的在蛋白水平及mRNA水平上抑制CUL4A的表達。與此同時，轉(zhuǎn)染了CUL4AsiRNA的胃癌細胞組與NC組相比NFκB的表達明顯下降，且下游的一些炎癥因子mRNA表達也下降。4、免疫組織化學實驗中，CUL4A蛋白主要染色在胃癌組織的細胞膜和細胞核中，而NFκB蛋白染色主要在細胞核中。CUL4A和NFκB在胃癌組織中的表達是呈正相關(guān)的。胃癌及癌旁組織的wes