副溶血性弧菌對(duì)含氯消毒劑的耐藥響應(yīng)及其耐藥機(jī)理探究.pdf

1、消毒劑的使用是當(dāng)今食品工業(yè)保障食品安全的一項(xiàng)重要措施,尤其是含氯消毒劑,由于其廣譜、高效、低毒和成本低等特點(diǎn),是水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)地和水產(chǎn)品加工業(yè)中消除食品腐敗菌和病原菌的首選消毒劑之一,來(lái)自環(huán)境和食品的食源性致病菌對(duì)消毒劑的耐藥性可能對(duì)人類健康及食品工業(yè)造成重大危害。副溶血性弧菌是水產(chǎn)品中引起細(xì)菌性食物中毒的重要食源性致病菌,它們分布廣泛、污染率高、危害嚴(yán)重,由該菌引起的食物中毒案例在世界各地均有報(bào)道。但該菌對(duì)消毒劑的耐藥性及其耐藥機(jī)理在國(guó)內(nèi)

2、外尚未見報(bào)道。本文系統(tǒng)研究了副溶血性弧菌對(duì)含氯消毒劑的耐藥響應(yīng)情況并對(duì)其耐藥機(jī)理進(jìn)行了探究:
　　1、副溶血性弧菌對(duì)含氯消毒劑的敏感性實(shí)驗(yàn)及耐藥菌株的篩選
　　以6株副溶血性弧菌實(shí)驗(yàn)室菌株 NQ-020、NQ-246、NQ-247、NQ-248、NQ-250及NQ-253為受試菌,通過(guò)氯胺-T和次氯酸鈉兩種含氯消毒劑亞致死濃度下連續(xù)性誘導(dǎo),成功的篩選出了對(duì)氯胺-T具有耐藥性的NQ-020-T、NQ-246-T、NQ-247-

3、T、NQ-248-T、NQ-250-T、NQ-253-T以及對(duì)次氯酸鈉具有耐藥性的NQ-020-Na、NQ-248-Na、NQ-250-Na、NQ-253-Na10株穩(wěn)定性耐藥菌株以及 NQ-246-Na和NQ-247-Na2株不穩(wěn)定耐受菌株。在TSB、MHB和TSB-PBS三種培養(yǎng)體系中,它們對(duì)氯胺-T和次氯酸鈉的耐受性均比原始菌株增加了一倍,其最小抑菌濃度值分別從128ppm、128ppm、64ppm上升到256ppm、256ppm

4、以及128ppm。
　　2、原始、耐藥菌株培養(yǎng)特性、菌落特征、生化特性比較研究
　　將原始、耐藥菌株分別接種于胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)、硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂(TCBS)、雙層科瑪嘉以及科瑪嘉培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),觀察其培養(yǎng)特性及菌落特征并對(duì)其進(jìn)行生化鑒定分析。結(jié)果表明,耐藥菌株的培養(yǎng)特性和菌落特征與原始菌株并沒有差異,在TSA、TCBS、雙層科瑪嘉以及科瑪嘉培養(yǎng)基中均生長(zhǎng)良好,并且都呈現(xiàn)出副溶血性弧菌的典型菌落特征。

5、然而,與原始菌株相比,耐藥菌株的生化特性卻不盡相同,通過(guò)消毒劑的誘導(dǎo),菌株在組氨酸同化、氨基乙酸芳胺酶、磷酸酶、β-半乳糖苷酸酶、鳥氨酸脫羧酶、β-葡萄糖苷酶、L-蘋果酸鹽同化、L-乳酸鹽同化、賴氨酸脫羧酶、琥珀酸鹽產(chǎn)堿、乳酸鹽產(chǎn)堿、Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶等方面發(fā)生了變化。
　　3、原始、耐藥菌株生長(zhǎng)特性比較研究
　　本實(shí)驗(yàn)比較研究了原始、耐藥菌株在不同NaCl濃度(1％、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%)以及不同pH值(

6、pH5.5、pH6、pH6.5、pH7、pH7.5、pH8、pH8.5、pH9)環(huán)境條件下的生長(zhǎng)特性。研究表明,對(duì)于鹽度而言,耐藥菌株和原始菌株的生長(zhǎng)情況并無(wú)太大差異,除NQ-250-T和 NQ-246-Na的最適鹽度從原始菌株的3%NaCl變?yōu)?%NaCl之外,其它耐藥菌株的最適鹽度與所對(duì)應(yīng)的原始菌株相同。在相同pH下,耐藥菌株與它們所對(duì)應(yīng)的的原始菌株的生長(zhǎng)情況發(fā)生了改變,但其最適pH并未發(fā)生變化。
　　4、副溶血性弧菌對(duì)含氯消

7、毒劑耐藥機(jī)理探究
　　從超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和DNA分型的生理角度探究了副溶血性弧菌對(duì)含氯消毒劑的耐藥調(diào)控機(jī)制。結(jié)果表明,與原始菌株相比,耐藥菌株的細(xì)胞形態(tài)都表現(xiàn)出了體積由大向小、形態(tài)由細(xì)長(zhǎng)狀向短粗狀或橢圓狀變化的趨勢(shì),并且經(jīng)過(guò)含氯消毒劑誘導(dǎo)后,副溶血性弧菌耐藥菌株的的SOD活性均有所增加。但20.5kb~1135kb分子量 DNA的脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)圖譜中并未出現(xiàn)耐藥菌株發(fā)生基因突變或超表達(dá)現(xiàn)