利用原生質(zhì)體融合技術(shù)構(gòu)建纖維燃料乙醇全糖發(fā)酵高產(chǎn)菌株.pdf

1、本文從南陽(yáng)酒精酵母1308(Saccharomyces cerevisiae)的二倍體出發(fā)，利用隨機(jī)孢子分析得到了單倍體并進(jìn)行了發(fā)酵性能試驗(yàn)，篩選到了一株發(fā)酵性能較好的單倍體D-12。 對(duì)親本菌株D-12和嗜鞣管囊酵母(Pachusolen tannophilus)P-01的原生質(zhì)體形成和再生條件進(jìn)行了試驗(yàn)，其最佳條件分別為：培養(yǎng)9h的菌體，采用0.1％β-巰基乙醇預(yù)處理30min，4mg/mL的蝸牛酶和4mg/mL的纖維素酶的

2、混和酶液酶解1.5h，原生質(zhì)體的形成率和再生率分別為93.6％和15.9％；培養(yǎng)21h的菌體，采用0.1％β-巰基乙醇預(yù)處理30min，4mg/mL的蝸牛酶和4mg/mL的纖維素酶的混和酶液酶解1.5h，原生質(zhì)體的形成率和再生率分別為97.7％和9.9％。 采用高溫滅活的方法對(duì)親株D-12的原生質(zhì)體進(jìn)行徹底滅活，條件為：70℃水浴處理35min。采用紫外滅活的方法對(duì)親株P(guān)-01的原生質(zhì)體進(jìn)行徹底滅活，條件為：15w紫外燈下距離3

3、0cm垂直照射60s。 用PEG作促融劑誘導(dǎo)滅活的雙親原生質(zhì)體進(jìn)行融合，經(jīng)TTC平板初篩、發(fā)酵復(fù)篩和同工酶鑒定，獲得一株能夠進(jìn)行全糖發(fā)酵(總糖濃度為6％)的性能優(yōu)良的融合子F10。其酒精度達(dá)到1.3ml/100ml(v/v)，比親株P(guān)-01(0.95ml/100ml)提高了36.8％。 最后，我們研究了融合子F10在玉米秸稈水解液中的發(fā)酵性能。F10發(fā)酵玉米秸稈水解液結(jié)束時(shí)酒精度達(dá)到1.1ml/100ml(v/v)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)