促孕復方有效組分DS147的質量控制及促進著床作用機制研究.pdf

1、DS147是從臨床經驗方促孕復方通過醇提后乙酸乙酯萃取并通過藥理實驗篩選得到的具有促進胚胎著床作用的中藥復方有效組分，該復方由黃芪、黃芩、白術和續(xù)斷組成。中藥質量控制是中藥研究熱點，也是中藥現代化發(fā)展的中藥敲門磚，指紋圖譜是質量控制研究的重要手段。本課題以HPLC指紋圖譜分析方法為主，對DS147進行質量控制研究。另外，本課題通過檢測小鼠正常組模型組和給藥組子宮組織蛋白質表達差異的變化，用蛋白組學激光捕捉顯微切割技術-二維電泳-質譜（l

2、aser capture microdissection-double dimension Electrophoresis-Mass spectum，LCM-DE-MS）技術路線研究分析DS147作用前后在子宮組織細胞中受調節(jié)的蛋白分子，以期篩選得到DS147促進著床，調控著床的關鍵分子，從而為深入準確闡明其藥效作用的分子調控機制和作用靶點。
　　1.促孕復方有效組分DS147指紋圖譜及質量研究
　　利用HPLC指紋圖譜對復

3、方DS147進行質量控制，經過多次探索，確定流動相系統(tǒng)為甲醇-水溶液，梯度洗脫，流速0.8mL/min。紫外檢測波長為234nm，運行時間120min。以此建立了復方DS147指紋圖譜分析方法，獲得了復方DS147指紋圖譜，找到13個色譜峰作為共有指紋峰。這些指紋峰特征性強，可以用來作為整體評價復方質量的指標。通過對照品的HPLC色譜圖保留時間與指紋圖譜的比較，確定2、6、9、10、12、13號峰分別是指標性成分獐牙菜苷、毛蕊異黃酮、芒

4、柄花苷、芒柄花素、漢黃芩素、白術內酯II，并計算了這6個指標性成分的含量。初步建立了復方DS147質量評價的方法。
　　2.促孕復方有效組分DS147促著床機制研究
　　分別利用超排卵模型和吲哚美辛模型造模，自著床后開始灌胃給予DS147，給藥5天后頸椎脫臼處死動物，取出子宮組織迅速投入液氮中保存。將液氮凍存的子宮組織粉碎，進行雙向凝膠電泳實驗，染色，掃描膠條，分析凝膠電泳圖，進行蛋白質差異化比較，得到含量改變的蛋白質，選取

5、有顯著性變化的蛋白質點做質譜分析。分析表明，正常（CN）組、超排卵模型（CM）組和超排卵模型中藥（CZ）組有15種蛋白質表達發(fā)生明顯改變。和CN組相比，CM組有3種蛋白質明顯表達下調，CZ組較之CM組明顯表達上調；有12種蛋白質CM組較之CN組明顯上調，但是CZ組較之CM組明顯下調。正常（IN）組、吲哚美辛模型（IM）組和吲哚美辛中藥（IZ）組有23種蛋白質表達發(fā)生明顯改變，和IN組相比，有7種蛋白質IM組較之IN組明顯下調，但是IZ組