促孕復(fù)方促著床活性成分及作用機制的研究.pdf

1、以體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)為中心的輔助生殖技術(shù)近年來迅速發(fā)展,在臨床得到了廣泛的應(yīng)用。然而ET胚胎著床障礙依然是限制此項技術(shù)發(fā)展的瓶頸。因此尋找提高超排卵(controlled ovarian stimulation,COS)后胚胎著床率的藥物以及對著床機制的探討成為生殖領(lǐng)域的熱點問題。本研究運用COS著床障礙動物模型篩選促孕復(fù)方促著床

2、活性物質(zhì),對活性成分作用機制進行分析研究,同時對活性成分DS147進行初步質(zhì)量控制研究。
　　一、促孕復(fù)方促進胚胎著床活性物質(zhì)篩選
　　對促孕復(fù)方進行梯度極性系統(tǒng)的萃取和柱層析分離,運用COS著床障礙動物模型篩選促著床活性成分。將受孕小鼠隨機分為正常組、模型組和給藥組,采用COS誘導(dǎo)小鼠胚泡著床障礙,給予促孕復(fù)方不同極性部位及部位活性成分進行干預(yù),于妊娠第8天(PD8)處死小鼠,觀察妊娠率及平均著床點數(shù)。結(jié)果顯示促孕復(fù)方乙酸

3、乙酯部位可將著床障礙小鼠妊娠率提高至50％(P<0.05),乙酸乙酯部位活性成分DS147可將著床障礙小鼠妊娠率提高至83.3%(P<0.01),且未發(fā)現(xiàn)對正常妊娠有不良影響。促孕復(fù)方有效部位活性成分DS147能更顯著地提高超排卵后的妊娠率,促進著床障礙小鼠胚胎著床。
　　二、促孕復(fù)方活性成分DS147促著床機制研究
　　采用COS誘導(dǎo)小鼠胚泡著床障礙,給予有效部位活性成分DS147進行干預(yù),于PD5天處死小鼠。從黃體發(fā)育,

4、子宮內(nèi)膜蛻膜化,基質(zhì)降解,血管滲透性,血管生成以及胎盤發(fā)育等方面來探討DS147促著胚胎著床的機制。結(jié)果表明該活性物質(zhì)的促著床作用與提高基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix matalloproteinases,MMP-2)表達,抑制金屬蛋白酶組織抑制物(tissue in-hibitor of metalloproteinases,TIMP-2)表達從而促進基質(zhì)降解,促進血管生成相關(guān)因子CD34,血管生成素(angiogenin,ANG)表

5、達促進血管生成,改善卵巢黃體溶解,促進子宮內(nèi)膜蛻膜化以及胎盤發(fā)育密切相關(guān)。DS147能顯著改善超排卵后受損傷的子宮內(nèi)膜及卵巢發(fā)育,提高妊娠率。
　　三、促孕復(fù)方活性成分DS147有關(guān)物質(zhì)含量測定和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　建立促孕復(fù)方DS147中總黃酮,總皂苷,總多糖的紫外含量測定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？傸S酮的含量采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法在505nm波長處測定,總皂苷采用5%香草醛冰醋酸-高氯酸比色法在540nm波長處測定,總

6、多糖采用苯酚-濃硫酸比色法在490nm波長處測定。采用薄層色譜法(TLC)對活性成分DS147中黃芪,黃芩,續(xù)斷進行定性鑒別;用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD)測定黃芪甲苷的含量。結(jié)果表明促孕復(fù)方DS147中總黃酮、總皂苷、總多糖的含量分別為33.78%,40.42%和9.36%;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為1.36%,2.35%,0.69%。黃芪甲苷的含量為0.331%,RSD=1.01%。紫外含量測定方法簡便準(zhǔn)確,可