靶向Notch-1基因的siRNA對(duì)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤性的影響.pdf

1、目的：觀察靶向Notch-1基因的小干擾RNA(siRNA)對(duì)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤性的影響。
　　 方法：采用無(wú)血清培養(yǎng)法(DMEM/F12培養(yǎng)基，含2％B27、LIF、EGF、b-FGF各20ng/mL)從人腦膠質(zhì)瘤母細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞系TJ905中提取GBM腫瘤干細(xì)胞，并使用免疫熒光的方法對(duì)其CD133和Nestin抗原的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)鑒定。使用OligofectamineTM將靶向Notch-1基因的siRN

2、A轉(zhuǎn)染人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞中，并設(shè)立無(wú)意序列siRNA(nonsensesiRNA)轉(zhuǎn)染組。然后，把經(jīng)Notch-1siRNA和經(jīng)無(wú)意序列siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞及未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分為三組，每組細(xì)胞懸液注射裸鼠5只，觀察動(dòng)物的成瘤情況，并記錄裸鼠移植瘤的體積v=1/2ab2(a為腫瘤的長(zhǎng)徑，b為腫瘤的寬徑)，觀察20天后處死動(dòng)物，取出腫瘤組織，常規(guī)石蠟包埋，組織切片HE染色并進(jìn)行Notch-1的免疫組化染色測(cè)定。
　　 結(jié)果：1．通

3、過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)的GBM細(xì)胞系細(xì)胞中只有少數(shù)會(huì)形成腫瘤細(xì)胞球。2．這種細(xì)胞球經(jīng)免疫熒光檢測(cè)其CD133和Nestin抗原高表達(dá)，證實(shí)其為膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞。3．經(jīng)靶向Notch-1基因的siRNA轉(zhuǎn)染后可以有效抑制GBM干細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)，Notch-1siRNA轉(zhuǎn)染組與NonsensesiRNA轉(zhuǎn)染組，以及Notch-1siRNA轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。4．免疫組化結(jié)果顯示：Notch-1的表達(dá)在Not