β干擾素的原核表達純化及其誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞自噬的研究.pdf

1、β干擾素是一類屬于Ⅰ型干擾素的重要細胞因子，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多重活性。目前β干擾素主要應(yīng)用于多發(fā)性硬化的臨床治療，是FDA批準的用于多發(fā)性硬化治療的唯一生物制品類藥物，也是目前治療多發(fā)性硬化最有效的藥物。由于具有抗腫瘤活性，β干擾素也經(jīng)常用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、前列腺癌、胰腺癌等惡性腫瘤的治療。由于β干擾素在體內(nèi)的半衰期很短（只有4-6小時），為了維持體內(nèi)有效的血藥濃度，需要多次用藥或采用蛋白質(zhì)長效修飾技術(shù)延長β干擾素的半衰

2、期。
　　本實驗采用分子克隆方法構(gòu)建了β干擾素表達載體，將表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達宿主進行異源表達，并對表達產(chǎn)物進行純化;采用活化的多聚唾液酸對β干擾素進行長效化修飾，但得到的修飾產(chǎn)物不夠穩(wěn)定，很容易發(fā)生沉淀;因此我們采用分子遺傳操作將重組多肽XTEN與β干擾素進行融合表達，最終獲得了重組蛋白，但其純化工作仍需進一步研究。
　　由于β干擾素具有抗腫瘤活性，我們對β干擾素體外抑制人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞作用及機理進行了研究，實驗結(jié)果表

3、明:β干擾素可呈時間和劑量依賴性抑制人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的生長，并誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生細胞自噬;采用3-MA、氯喹等細胞自噬抑制劑或RNA干擾技術(shù)抑制細胞自噬，可增強β干擾素對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的生長抑制及細胞凋亡;而采用Z-VADfmk抑制細胞凋亡，又可削弱β干擾素誘導(dǎo)的細胞自噬，說明β干擾素誘導(dǎo)的細胞自噬可能是人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對β干擾素引起的細胞凋亡的保護作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)β干擾素誘導(dǎo)細胞自噬過程中有Akt/mTOR信號通路的抑制和