STAT1基因轉(zhuǎn)染對NSCLC移植瘤生長的影響.pdf

1、目的:
　　 通過構(gòu)建信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)基因表達載體轉(zhuǎn)染肺癌細胞株并使用該細胞株建立動物移植腫瘤模型，觀察STAT1基因高表達時對肺腺癌移植瘤生長的影響。
　　 方法:
　　 1.為建立高表達STAT1蛋白水平的肺癌細胞株，使用含CMV啟動子及綠色熒光標記蛋白(EGFP)的STAT1慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株NCL-H1299，同時設不含STAT1基因的空白EGFP載體

2、作為對照。轉(zhuǎn)染48h后通過熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染后細胞的熒光蛋白表達，Western Blot檢測細胞STAT1蛋白表達從而對轉(zhuǎn)染結(jié)果進行鑒定。
　　 2.為觀察STAT1基因高表達時對腫瘤體內(nèi)生長的影響，建立動物皮下移植腫瘤模型進行研究。選擇18只Balb/c-nu雄性裸小鼠，根據(jù)接種細胞的不同隨機分為三組:未轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染空白載體細胞組（空載體組），轉(zhuǎn)染STAT1基因細胞組（轉(zhuǎn)染組）。在裸小鼠4周齡時按組別接種相應的細胞懸液至右側(cè)

3、背部皮下，接種細胞數(shù)1×107/只，接種體積200μl。在皮下團塊出現(xiàn)后使用游標卡尺隔天測量團塊的長徑(A)及短徑(B)，并計算團塊體積V=A×B×B/2cm3，根據(jù)各組腫瘤體積的平均值繪制生長曲線，至最大瘤塊體積超過2cm3時結(jié)束測量;動物處死后剝離腫瘤，稱取各組瘤塊重量。
　　 3.為探討STAT1基因在移植瘤生長中的作用，使用Western Blot法檢測各組腫瘤STAT1蛋白表達及磷酸化水平差異并使用Quality on

4、e軟件進行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染STAT1基因48h后的H1299細胞，可見明亮綠色熒光;使用Western Blot法檢測細胞提取蛋白顯示STAT1基因轉(zhuǎn)染組的STAT1蛋白表達明顯升高。證實STAT1基因表達載體轉(zhuǎn)染肺癌細胞成功。
　　 2.細胞接種裸小鼠皮下21d后動物接種部位出現(xiàn)直徑5-6mm皮下團塊，瘤塊平均體積及成瘤時間均無顯著性差異，證實H1299細胞皮下接種具有較好的

5、建模成功率。繼續(xù)生長12d后，最大瘤體超過2cm3，結(jié)束體內(nèi)觀察。測量數(shù)據(jù)顯示:接種33d后，轉(zhuǎn)染組腫瘤體積高于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組腫瘤體積高于空載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。轉(zhuǎn)染組腫瘤重量小于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組腫瘤重量小于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。未轉(zhuǎn)染組與空載體組腫瘤體積與重量之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.

6、剝離后的腫瘤組織經(jīng)Western Blot檢測STAT1蛋白及磷酸化STAT1蛋白(pSTAT1)后經(jīng)Quanlity one半定量分析示轉(zhuǎn)染組腫瘤組織內(nèi)STAT1蛋白表達量高于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組腫瘤組織內(nèi)STAT1蛋白表達量高于空載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。轉(zhuǎn)染組腫瘤組織內(nèi)pSTAT1蛋白水平高于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組腫瘤組織內(nèi)pSTAT1蛋白表達量高于空

7、載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。未轉(zhuǎn)染組與空載體組腫瘤組織內(nèi)STAT1蛋白及磷酸化水平，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本實驗成功構(gòu)建了轉(zhuǎn)染STAT1基因的肺癌細胞株NCL-H1299，并使用該細胞株成功建立了裸小鼠皮下移植瘤模型。
　　 2.STAT1基因轉(zhuǎn)染可抑制NCL-H1299移植瘤在體內(nèi)生長。
　　 3.STAT1基因轉(zhuǎn)染抑制移植瘤生長可能通過在腫瘤組織內(nèi)