STAT1基因轉染對NSCLC移植瘤生長的影響.pdf

1、目的:
　　 通過構建信號轉導和轉錄激活因子1(STAT1)基因表達載體轉染肺癌細胞株并使用該細胞株建立動物移植腫瘤模型，觀察STAT1基因高表達時對肺腺癌移植瘤生長的影響。
　　 方法:
　　 1.為建立高表達STAT1蛋白水平的肺癌細胞株，使用含CMV啟動子及綠色熒光標記蛋白(EGFP)的STAT1慢病毒表達載體轉染非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株NCL-H1299，同時設不含STAT1基因的空白EGFP載體

2、作為對照。轉染48h后通過熒光顯微鏡檢測轉染后細胞的熒光蛋白表達，Western Blot檢測細胞STAT1蛋白表達從而對轉染結果進行鑒定。
　　 2.為觀察STAT1基因高表達時對腫瘤體內生長的影響，建立動物皮下移植腫瘤模型進行研究。選擇18只Balb/c-nu雄性裸小鼠，根據接種細胞的不同隨機分為三組:未轉染組，轉染空白載體細胞組（空載體組），轉染STAT1基因細胞組（轉染組）。在裸小鼠4周齡時按組別接種相應的細胞懸液至右側

3、背部皮下，接種細胞數1×107/只，接種體積200μl。在皮下團塊出現后使用游標卡尺隔天測量團塊的長徑(A)及短徑(B)，并計算團塊體積V=A×B×B/2cm3，根據各組腫瘤體積的平均值繪制生長曲線，至最大瘤塊體積超過2cm3時結束測量;動物處死后剝離腫瘤，稱取各組瘤塊重量。
　　 3.為探討STAT1基因在移植瘤生長中的作用，使用Western Blot法檢測各組腫瘤STAT1蛋白表達及磷酸化水平差異并使用Quality on

4、e軟件進行分析。
　　 結果:
　　 1.經熒光顯微鏡檢測轉染STAT1基因48h后的H1299細胞，可見明亮綠色熒光;使用Western Blot法檢測細胞提取蛋白顯示STAT1基因轉染組的STAT1蛋白表達明顯升高。證實STAT1基因表達載體轉染肺癌細胞成功。
　　 2.細胞接種裸小鼠皮下21d后動物接種部位出現直徑5-6mm皮下團塊，瘤塊平均體積及成瘤時間均無顯著性差異，證實H1299細胞皮下接種具有較好的

5、建模成功率。繼續(xù)生長12d后，最大瘤體超過2cm3，結束體內觀察。測量數據顯示:接種33d后，轉染組腫瘤體積高于未轉染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉染組腫瘤體積高于空載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。轉染組腫瘤重量小于未轉染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉染組腫瘤重量小于未轉染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。未轉染組與空載體組腫瘤體積與重量之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.

6、剝離后的腫瘤組織經Western Blot檢測STAT1蛋白及磷酸化STAT1蛋白(pSTAT1)后經Quanlity one半定量分析示轉染組腫瘤組織內STAT1蛋白表達量高于未轉染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉染組腫瘤組織內STAT1蛋白表達量高于空載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。轉染組腫瘤組織內pSTAT1蛋白水平高于未轉染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉染組腫瘤組織內pSTAT1蛋白表達量高于空

7、載體組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。未轉染組與空載體組腫瘤組織內STAT1蛋白及磷酸化水平，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.本實驗成功構建了轉染STAT1基因的肺癌細胞株NCL-H1299，并使用該細胞株成功建立了裸小鼠皮下移植瘤模型。
　　 2.STAT1基因轉染可抑制NCL-H1299移植瘤在體內生長。
　　 3.STAT1基因轉染抑制移植瘤生長可能通過在腫瘤組織內