肝癌H22細(xì)胞微粒對(duì)小鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf

1、背景與目的:研究表明，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞源性微粒（Tumor-derived microparticles,TMPs）作為一種細(xì)胞間通訊的介質(zhì)，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。本研究通過(guò)梯度差速離心的方法分離提取肝癌H22細(xì)胞微粒（H22 cell-derived microparticles,HMPs），建立肝癌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究 H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長(zhǎng)的影響。并且用肝素和Dynasore干預(yù)H22細(xì)胞微粒與肝癌H22細(xì)胞的相互作用，

2、進(jìn)一步研究H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長(zhǎng)的影響。
　　方法:
　　1.將經(jīng)BALB/c小鼠腹腔傳代培養(yǎng)的肝癌H22細(xì)胞，采用懸浮細(xì)胞離心甩片處理、HE染色，光鏡下對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察。
　　2.將經(jīng)小鼠腹腔穩(wěn)定培養(yǎng)3代的H22細(xì)胞體外無(wú)血清誘導(dǎo)48h，通過(guò)梯度差速離心的方法分離提取肝癌H22細(xì)胞微粒，采用透射電鏡對(duì)其形態(tài)進(jìn)行觀察，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)微粒的大小、數(shù)量和其分子表型，以及利用Bradford法對(duì)其進(jìn)行蛋白定量。
　

3、　3.將 H22細(xì)胞與不同劑量的微粒共孵育后接種于BALB/c小鼠皮下，觀察不同的劑量對(duì)小鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的作用。
　　4.選擇某一有作用的劑量進(jìn)行肝素（Heparin）和Dynasore的干預(yù)處理，進(jìn)一步研究肝癌H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)梯度差速離心的方法分離提取了 H22細(xì)胞微粒，透射顯微電鏡結(jié)果顯示，分離提取的H22細(xì)胞微粒為直徑＜1μm、大小不一、閉合的微囊泡。通過(guò)流式細(xì)胞

4、術(shù)對(duì)其進(jìn)行絕對(duì)計(jì)數(shù)和表面磷脂酰絲氨酸（PS）的檢測(cè)，總共分離提取到1×107（約為6.7mg的蛋白當(dāng)量）H22細(xì)胞微粒，足夠用于本研究的在體實(shí)驗(yàn)，而且PS陽(yáng)性的微粒比例為7.36％。
　　2.H22細(xì)胞微粒高劑量組的移植瘤體積較PBS對(duì)照組和H22細(xì)胞微粒低劑量組的均大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其移植瘤瘤重也較PBS對(duì)照組和H22細(xì)胞微粒低劑量組重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而H22細(xì)胞微粒中劑量組分別與高劑

5、量組和低劑量組比較，其移植瘤的體積和瘤重均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3.對(duì)于肝素干預(yù)組，結(jié)果顯示，經(jīng)肝素處理的H22細(xì)胞微粒與H22細(xì)胞共孵育組（Heparin-HMPs-H22組）的小鼠移植瘤的瘤重較未處理組（HMPs-H22組）的輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同樣，其移植瘤的體積也較HMPs-H22組的小，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4.對(duì)于Dynasore干預(yù)組，結(jié)果顯示，經(jīng)Dyn

6、asore干預(yù)H22細(xì)胞微粒與H22細(xì)胞共孵育組（Dy-HMPs-H22組）的移植瘤體積較未處理組（HMPs-H22組）的小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與HMPs-H22組比較，Dy-HMPs-H22組的移植瘤瘤重也較輕，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.高劑量的H22細(xì)胞微粒可能通過(guò)促進(jìn)小鼠肝癌移植瘤的生長(zhǎng)，從而促進(jìn)腫瘤體積與瘤重的增長(zhǎng)；
　　2.H22細(xì)胞微粒對(duì)小鼠肝癌移植瘤生長(zhǎng)的促進(jìn)