外加因子對兩相系統(tǒng)轉(zhuǎn)化植物甾醇制備雄烯二酮的影響.pdf

1、雄烯二酮(AD)是制備甾體激素類藥物的重要中間體，可通過微生物選擇性切除植物甾醇側(cè)鏈獲得，但該法仍存在底物甾醇進(jìn)入細(xì)胞困難等問題，因此產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率較低。本文在現(xiàn)有菌株及發(fā)酵液配方基礎(chǔ)上，引入魚精蛋白、甘氨酸、表面活性劑及超聲輻照作為外加因子，提高了產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率；本文還對罐發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化和產(chǎn)物提取工藝研究，為微生物法工業(yè)化生產(chǎn)雄烯二酮提供了理論依據(jù)。本研究的主要結(jié)論有： 通過對細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)抑制劑的對比研究，確定使用甘氨酸效果較好，其濃

2、度為3.0g/L時(shí)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率達(dá)83.7％；通過對表面活性劑的研究，確定最佳表面活性劑為Tween-80/Span-80，當(dāng)濃度為0.100％時(shí)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率達(dá)85.6％；通過超聲輻照對轉(zhuǎn)化效果的研究，發(fā)現(xiàn)采用60W超聲輻照每隔12h超聲180s，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率達(dá)85.3％；通過對Tween-80/Span-80與超聲輻照協(xié)同作用的研究可知，當(dāng)Tween-80/Span-80濃度為0.075％、每隔12h超聲150s時(shí)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率可達(dá)88.7

3、％。 在上述研究基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化得到最適5L罐發(fā)酵條件為：初始pH值8.5、溫度32℃、每升發(fā)酵液通氣1L/min、攪拌速率450r/min，在此條件下產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率平均達(dá)86.6％。在此基礎(chǔ)上，研究發(fā)酵過程發(fā)酵液pH值的變化情況，結(jié)果表明在發(fā)酵到60-80h時(shí)發(fā)酵液pH值從6.9降至5.7，試驗(yàn)證明當(dāng)發(fā)酵至60h時(shí)，每隔12h調(diào)節(jié)pH值一次對產(chǎn)物轉(zhuǎn)化有利，轉(zhuǎn)化率可達(dá)89.7％，發(fā)酵周期縮短到96h，迸一步研究發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵過程