mycobacteriumsp.bfz304轉(zhuǎn)化植物甾醇產(chǎn)9α羥基雄烯二酮工藝研究

1、分類號：密級：學校代碼：1 0 0 5 7研究生學號：1 3 8 0 9 9 5 6M y c o b a c t e r i u m s p ．B F Z 3 0 4 轉(zhuǎn)化植物甾醇產(chǎn)9 a 【．羥基雄烯二酮工藝研究S T U D Y O N T H E T R A N S F o R M A T I O N O F P H Y T O S T E R o L T o9 缸一H Y D R o X Y 二4 一A N D R O S T

2、 E N E 一3 ．1 7 一D I O N E B YM Y C o B A C T E R I U M S P ：B F Z 3 0 4專業(yè)名稱：輕工技術與工程( 專業(yè))指導教師姓名：趙樹欣教授研究生姓名：柳相鶴中請學位級別：全日制專業(yè)學位碩士論文提交日期：2 0 1 6 年6 月論文課題來源：企業(yè)合作學位授予單位：天津科技大學摘要利用分枝桿菌等微生物轉(zhuǎn)化植物甾醇生產(chǎn)甾體醫(yī)藥中間體9 儀一羥基雄烯二酮( 9 0 【一O H —A

3、D ) 是當下甾體醫(yī)藥工業(yè)體系的一條重要工藝路線。木文以M y c o b a c t e r i u ms p ．B F Z 3 0 4 作為實驗菌株，以植物甾醇為底物，通過搖瓶發(fā)酵研究了刁i 同碳源、氮源、磷酸鹽等培養(yǎng)基成分、不同培養(yǎng)條件以及添加促溶劑對M y c o b a c t e r i u ms p ．B F Z 3 0 4 轉(zhuǎn)化植物甾醇生產(chǎn)9 Ⅸ．羥基雄烯二酮的影H 向。最終獲得了收率大大提高了的9 C 【．羥基雄烯二酮

4、的產(chǎn)率。首先對培養(yǎng)摹成分進行單因素實驗，篩選出最優(yōu)碳氮源以及磷酸鹽等培養(yǎng)基各個成分，在單因素實驗的基礎上，以9 儀一羥基雄烯二酮的產(chǎn)量為衡量指標，采用響應面法優(yōu)化了轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的組成，并建立了玉米漿、葡萄糖、硝酸鈉、磷酸氫二銨變化的二次回歸方程，探討了各因素對9 僅．羥基雄烯- N 產(chǎn)量的影響。最終確定最適宜的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基為葡萄糖l o g ／L 、玉米漿4 0 ∥L 、硝酸鈉6 9 ／L 、磷酸氫二銨0 ．7 9 ／L 。隨后利用最優(yōu)培養(yǎng)

5、基對發(fā)酵轉(zhuǎn)化條件如初始p H ，接種量，搖瓶裝液量，培養(yǎng)溫度等進行篩選，優(yōu)化結(jié)果如下：滅菌前調(diào)p H 為7 ．0 ，以4 ％的接種量接種，轉(zhuǎn)速為1 5 0 r p m 時，裝液量為5 0 m L ，培養(yǎng)溫度為3 0 。C 。然后利用優(yōu)化好的培養(yǎng)基成分和轉(zhuǎn)化條件對菌株轉(zhuǎn)化能力進行驗證，在此條件下的結(jié)果為：底物植物甾醇添加量為l O ∥L 時，9 Ⅸ一羥基雄烯二酮的產(chǎn)量可達到4 ．8 6 ∥L ，底物植物警醇的轉(zhuǎn)化率為8 0 ％，提高了近4