凍融人胎兒卵巢組織異種移植的實驗研究.pdf

1、目的 卵巢冷凍和移植的實驗研究開始于上世紀50年代，半個世紀以來的研究表明卵巢組織的冷凍保存和移植能恢復(fù)由于化療、放療或手術(shù)而面臨卵巢早衰的女性的生殖能力。有研究證明猴、貓和成人的卵巢組織異種移植到免疫缺陷鼠體內(nèi)有正常竇卵泡的生長，但胎兒卵巢組織中的卵母細胞是否與成人卵細胞具有相同發(fā)育能力的研究甚少。因此我們進行了以裸鼠為受體的凍融人胎兒卵巢組織的異種移植，從光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、凋亡及增殖細胞核抗原表達等方面進行評價，探討移

2、植后卵泡生長發(fā)育的情況，為凍融人胎兒卵巢組織作為潛在供體和臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法 實驗分為四組：新鮮組、凍融組、移植腎臟組和移植肌肉組，新鮮的胎兒卵巢組織為新鮮組，慢凍一快融的胎兒卵巢組織為凍融組，移植腎臟組和移植肌肉組的處理如下：凍融的胎兒卵巢組織異種移植到24只去勢裸鼠的腎被膜下／背部兩側(cè)肌肉中。2個月后開始隔天注射5IU的PMSG，持續(xù)5侖月。注射5IU的HCG36小時后獲取移植物。將所有胎兒卵巢組織石蠟包埋

3、后5um連續(xù)切片，進行光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、凋亡(Tunel)和增殖細胞核抗原(PCNA)的檢測。 結(jié)果 一、新鮮組與凍融組的檢測 1、光學(xué)顯微鏡觀察：新鮮組和凍融組中絕大多數(shù)是原始卵泡，與新鮮組相比，凍融組正常及總的原始卵泡數(shù)雖有所下降，異常原始卵泡數(shù)稍有升高，但兩組間無顯著性差異。 2、電子顯微鏡觀察：與新鮮組相比，凍融組卵巢組織中細胞的超微結(jié)構(gòu)大部分保存良好。冷凍損傷在卵母細胞主要表現(xiàn)為胞漿內(nèi)的空

4、泡，線粒體水腫，偶見核膜的皺縮；在顆粒細胞主要為輕度的水腫和少量空泡；間質(zhì)組織未見明顯損傷。 3、凋亡的檢測：分別觀察原始卵泡223和179個，凋亡卵泡數(shù)分別為5和7個，凋亡率分別為0．02％和O．04％。凋亡大多發(fā)生在卵母細胞，偶為顆粒細胞的凋亡。 4、PCNA的檢測：分別觀察原始卵泡125和109個，均未見有PCNA的陽性表達。 二、移植腎臟組和移植肌肉組的檢測 1、動物生存及移植物的回收：裸鼠生存率

5、為83．3％，移植腎臟組和移植肌肉組的移植物回收率分別為60．0％和25．0％。 2、光學(xué)顯微鏡：兩組中均以原始卵泡為主，可見各級卵泡及閉鎖的竇卵泡。移植腎臟組中(單位切片數(shù))初級卵泡、次級卵泡及竇卵泡數(shù)均多與移植肌肉組。兩組每高倍鏡視野下的原始卵泡數(shù)相比無顯著性差異，與新鮮組和凍融組相比明顯減少。 3、凋亡的檢測：兩移植組中均未見原始卵泡的凋亡，初級和次級卵泡表現(xiàn)為數(shù)個顆粒細胞的凋亡。間質(zhì)中偶見細胞的凋亡。 4

6、、PCNA的測定結(jié)果：兩移植組原始卵泡中除數(shù)個立方形前顆粒細胞外，無PCNA陽性表達。PCNA陽性表達主要為初級卵泡、次級卵泡和竇卵泡的顆粒細胞和／或卵母細胞。卵巢間質(zhì)也有大量PCNA的陽性表達。 結(jié)論 1、冷凍后人胎兒卵巢組織的原始卵泡無明顯減少，且形態(tài)結(jié)構(gòu)保存良好；超微結(jié)構(gòu)的損傷主要為線粒體的水腫和胞漿內(nèi)空泡；卵泡凋亡的表達較低與新鮮胎兒卵巢組織相似，這些都證明慢速冷凍法適合人胎兒卵巢組織的保存。 2、人胎兒