白藜蘆醇對Mum2c細胞增殖與凋亡的影響及機制研究.pdf

1、目的：研究白藜蘆醇(Resveratrol，Res)對體外培養(yǎng)的人脈絡膜惡性黑色素瘤細胞Mum2c增殖及凋亡的影響，初步探討其作用機制。
　　方法：采用體外細胞培養(yǎng)方法，應用含Res濃度為0μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、48μg/ml、64μg/ml、80μg/ml的RPMI-1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Mum2c，分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，光鏡下觀察細胞形態(tài)變化，采用CCK-8法檢測A

2、值，比較各組Mum2c增殖被抑制情況。應用含Res濃度為0μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的RPMI-1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Mum2c，培養(yǎng)24h后，AnnexinV-FITC/PI雙標流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率并進行熒光顯微鏡檢查。應用含Res濃度為0μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的RPMI-1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Mum2c達24h后，應用JC-1檢測了解細胞線粒

3、體跨膜電位變化，酶標法檢測caspase-3活性，免疫組織化學法檢測細胞內(nèi)Bcl-2表達水平。
　　結(jié)果：Res作用Mum2c后，光鏡下可見細胞間間隙增大，胞體皺縮，核染色質(zhì)邊集、凝聚。CCK-8檢測顯示經(jīng)16μg/ml及更高濃度的Res作用24h、48h、72h后Mum2c的A值與陰性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Res濃度與細胞增殖抑制率間具有正相關(guān)性。經(jīng)16μg/ml的Res作用24h后Mum2c早期凋亡率為2

4、.78±0.33％，與陰性對照組(2.02±0.84％)相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；經(jīng)32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的Res作用24h后Mum2c早期凋亡率分別為7.00±0.98％、11.87±0.60％、15.39±1.04％，與陰性對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，各組組間相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Res濃度與細胞早期凋亡率間具有正相關(guān)性。經(jīng)32μg/ml、40μg/ml、48μ

5、g/ml的Res作用24h后，經(jīng)JC-1檢測熒光顯微鏡下觀察，見隨濃度增加紅光片下呈低紅染色的細胞比例逐漸增加、高紅染色的細胞比例相應減少，與陰性對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，各組組間相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；酶標法檢測顯示各組caspase-3的A值分別為0.246±0.015、0.349±0.037、0.566±0.043，與陰性對照組(0.151±0.010)相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，各

6、組組間相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；免疫組化法檢測顯示各組Bcl-2表達陽性的Mum2c百分率分別為49.60±1.51％、38.00±1.26％、26.67±1.21％，與陰性對照組(61.33±1.21％)相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，各組組間相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：Res能夠抑制體外培養(yǎng)的Mum2c增殖并誘導其凋亡，其誘導細胞凋亡機制可能與破壞細胞線粒體膜電位，caspase-