三氧化二砷聯(lián)合TRAIL對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 探討三氧化二砷(AS2O3)及AS2O3聯(lián)合TRAIL對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其可能機(jī)制。
　　方法: 在體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞株至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,隨機(jī)分為6組:對(duì)照組、1μmol/L AS2O3組、10μmol/L AS2O3組、100μg/L TRAIL組、1μmol/L AS2O3+100μg/L TRAIL組、10μmol/L AS2O3+100μg/L TRAIL組。在其分別作用24h、48h、

2、72h后采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況;作用48h后行流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,提取總RNA及蛋白,RT-PCR檢測(cè)DR4 mRNA、DR5 mRNA、Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA、MDR1 mRNA、MRP1 mRNA、NF-κB mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)NF-κB蛋白的表達(dá),ELISA檢測(cè)NF-κB的活性。
　　結(jié)果: 1.細(xì)胞增殖抑制率:與單藥相比,聯(lián)合藥物

3、組作用24h、48h和72h對(duì)A549的增殖抑制率明顯增強(qiáng)(P<0.05),并有時(shí)間和AS2O3藥物濃度依賴性。2.細(xì)胞凋亡檢測(cè):流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組的凋亡率比單藥組高(P<0.01),具AS2O3藥物濃度依賴性;Hoechest熒光染色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組可見到大量凋亡細(xì)胞。3.RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá):AS2O3可以上調(diào) Caspase-3 mRNA的表達(dá);聯(lián)合藥物組比單藥組明顯上調(diào) DR4 mRNA、DR5 mRNA、Ca

4、spase-3 mRNA的表達(dá);下調(diào)Survivin mRNA、MDR1 mRNA、MRP1 mRNA、NF-κB mRNA表達(dá)。4. Western blot檢測(cè):聯(lián)合藥物組比單藥組明顯下調(diào)NF-κB蛋白的表達(dá)。5.ELISA檢測(cè):聯(lián)合藥物組比單藥組明顯抑制NF-κB的活性。
　　結(jié)論: 本研究在體外證明AS2O3增強(qiáng)TRAIL對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用和誘導(dǎo)凋亡作用,其機(jī)制可能是1.通過(guò)死亡受體通路和線粒體通路,上調(diào)