蛇床子素對肺癌A549細胞系增殖、凋亡、侵襲的影響及其機制的研究.pdf

1、前言：肺癌在世界范圍內是癌癥死亡的首要病因,其中非小細胞肺癌占所有肺癌病例的80％。盡管臨床上對于肺癌的診斷及治療的技術不斷發(fā)展,但是許多國家肺癌的5年生存率仍低于15％。為了進一步提高肺癌的生存率,人們希望找到療效好且不良反應低的治療肺癌的藥物。近年來從中藥中提取的天然化合物因其廣泛的生物活性、低毒性和較少的副作用而備受關注。
　　 蛇床子素,7-甲氧基-8-異戊烯基香豆素,是蛇床子中活性成分,蛇床子素可以從許多藥用植物中提取

2、,如蛇床子及其他植物。在我國的傳統(tǒng)中醫(yī)中,蛇床子素長期以來被用于治療濕疹,皮膚搔癢,陰道滴蟲感染及性功能障礙等。最近的研究表明蛇床子素可能具有抑制增殖,擴張血管,抗炎,抗微生物,抗過敏及預防肝炎等作用。此外,蛇床子素的抗腫瘤作用已經有所報道。這些研究表明,蛇床子素能抑制腫瘤細胞生長、侵襲和轉移。然而,蛇床子素對人類肺癌細胞的影響及機制目前仍不清楚。
　　 本研究探討天然化合物蛇床子素(Osthole)對肺癌的抗腫瘤作用,對蛇床子

3、素對肺癌A549細胞系增殖、周期、凋亡、侵襲的影響及機制進行初步探討。為深入研究蛇床子素抗腫瘤機制提供試驗基礎。
　　 材料與方法：
　　 一、蛇床子素對肺癌A549細胞增殖、周期的影響的研究
　　 1、采用四甲基偶氮噻藍(MTT)法檢測蛇床子素對A549細胞增殖的影響;
　　 2、流式細胞儀檢測蛇床子素對A549細胞細胞周期的影響;
　　 3、western blotting檢測蛇床子素作用于A

4、549細胞后Cyclin蛋白家族、CDC2等相關蛋白表達。
　　 二、蛇床子素對肺癌A549細胞凋亡的影響的研究
　　 1、采用流式細胞儀AnnexinV/PI雙染法檢測蛇床子素作用于A549細胞后細胞凋亡情況;
　　 2、熒光顯微鏡觀察蛇床子素作用于A549細胞后細胞形態(tài)變化;
　　 3、western blotting檢測蛇床子素作用于A549細胞后Bcl-2、Bax等凋亡相關蛋白表達;
　　

5、 4、western blotting檢測蛇床子素作用于A549細胞后Akt及p-Akt表達。
　　 三、蛇床子素對肺癌A549細胞侵襲、遷移的影響的研究
　　 1、Transwell小室分析蛇床子素對肺癌A549細胞侵襲的影響;
　　 2、Transwell小室分析蛇床子素對肺癌A549細胞遷移的影響;
　　 3、western blotting檢測蛇床子素作用于A549細胞后MMP-2、MMP-9侵襲

6、相關蛋白表達。
　　 結果：
　　 一、蛇床子素對肺癌A549細胞增殖、周期的影響
　　 1、MTT法檢測結果顯示隨著濃度的加大和作用時間的延長,藥物對細胞的增殖有明顯的抑制作用,呈現明顯的時間一劑量效應關系。
　　 2、流式細胞儀進行細胞周期檢測,蛇床子素對A549有周期阻滯作用,阻滯于G2/M期。
　　 3、采用western blotting方法檢測蛇床子素對細胞周期相關蛋白,隨藥物濃度增加

7、,Cyclin B1及CDC2表達較少,并具有劑量依賴性。
　　 二、蛇床子素對肺癌A549細胞凋亡影響的研究
　　 1、采用流式細胞儀AnnexinV/PI雙染法檢測細胞凋亡;流式細胞檢測細胞凋亡分析表明作用隨濃度的增高,早期凋亡和晚期凋亡細胞的比例都逐漸增加,與對照組相比差異具有顯著性。
　　 2、熒光電子顯微鏡觀察藥物作用后的細胞中可見染色體邊集、核碎裂等典型的凋亡改變,而對照組沒有相應的變化。
　　

8、 3、采用western blotting方法檢測蛇床子素對凋亡相關的蛋白如Bcl-2、Bax的表達的影響。隨藥物濃度增加,Bax蛋白表達水平逐漸升高,而Bcl-2蛋白表達水平隨濃度的增加逐漸降低,Bax/Bcl-2的比值逐漸升高,并呈現劑量依賴性。
　　 4、蛇床子素作用后,采用western blotting方法檢測p-Akt逐漸降低,總Akt未見明顯變化。
　　 三、蛇床子素對肺癌A549細胞侵襲、遷移的影響的研

9、究
　　 1、應用Transwell小室檢測蛇床子素對肺癌A549細胞侵襲、遷移能力的影響,發(fā)現蛇床子素處理后實驗組細胞的侵襲、遷移能力有明顯降低。
　　 2、采用western blotting方法檢測MMP-2、MMP-9侵襲相關蛋白表達。隨藥物濃度的增加,MMP-2、MMP-9表達減少,并具有劑量依賴性。
　　 結論：
　　 1、蛇床子素可以抑制肺癌A549細胞的增殖,這種抑制作用具有時間和濃度依賴