白英提取液誘導(dǎo)人肺癌A549細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、白英(solanum lyratum thunb，SLT)為我國傳統(tǒng)抗癌中草藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕、化瘀消腫等功效，臨床常用于肝癌、肺癌、食道癌、胃癌等多種癌癥的治療。迄今為止，白英的抗腫瘤作用機(jī)制及其活性成分尚未完全明確。而對(duì)白英誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤細(xì)胞增殖方面的研究，國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究探討白英水提液抑制人肺癌A549細(xì)胞增殖效應(yīng)和誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1． 取白

2、英全草(干品)按常規(guī)煎熬、過濾、濃縮，獲白英水提液。 2．體外培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為正常對(duì)照組、白英水提液作用組(終濃度分別為10、20、40mg/ml)和陽性對(duì)照組(DDP，終濃度為25mg/L)。 3．利用白英水提液分別作用人肺癌A549細(xì)胞24、48、72和96h后，采用四唑鹽(MTT法)檢測(cè)人肺癌A549細(xì)胞抑制率和IC<,50>值。 4． 白英水提液作用人肺癌A549細(xì)胞48h后，采用熒

3、光顯微鏡觀察人肺癌A549細(xì)胞形態(tài)變化。 5． 白英水提液作用人肺癌A549細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期變化。 6． 白英水提液作用人肺癌A549細(xì)胞48h后，半定量RT-PCR檢測(cè)Fas、FasL、caspase-8和caspase-3 mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果 1． 白英提取液對(duì)人肺癌A549細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用，且這種作用呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。濃度為10、20、4

4、0mg/ml的白英提取液和25mg/LDDP處理細(xì)胞24h后細(xì)胞抑制率分別為(15.43±1.00)％、(31.32±1.73)％、(60.95±0.47)％和(79.49±0.96)％；處理48小時(shí)的細(xì)胞抑制率分別為(26.40±1.28)％、(42.09±1.54)％、(69.39±2.13)％和(86.87±1.61)％；處理72小時(shí)的細(xì)胞抑制率為(44．04+2．02)％、(58．88+2．02)％、(76．63+2．86)％~

5、H(92．13+0．82)％；處理96小時(shí)的細(xì)胞抑制率分別為(48．08+1．60)％、(67．03+1．71)％、(83．70+2．48)％~H(94．27+1．13、)％，以上各組細(xì)胞抑制率與正常對(duì)照組相比均有顯著差異(P

6、。形態(tài)學(xué)觀察可見細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)凝集、邊聚等特征。3． 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，白英各濃度組和DDP組均出現(xiàn)凋亡所特有的亞二倍體峰(sub—G1)。10、20和40mg／ml白英組和DDP組細(xì)胞凋亡率分別為(17．75+1．25)％、(25．96+3．12)％、(38．06+2．49)％~H(57．31+5．56)％，顯著高于正常對(duì)照組(3．1 0+2．28)％(P<0．01)。G0／G1細(xì)胞比率分別為(37．26+6．20)％、(

7、48．69+4．04)％、(57．54+1．88)％和(33．54+3．33)％，顯著高于正常對(duì)照組(28．04+4．48)％(P<0．05或P<0．01)。S期白英處理組各細(xì)胞比率分別為(50．22+4．50)％、(41．58+3．39)％和(31．46~2．13)％，顯著低于正常對(duì)照組(58．70+3．1 1)％(P<0．05或P<0．01)，而DDP組(65．17+2．34)％N高于正常對(duì)照組rP

8、定量RT—PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)as、caspase一8和caspase一3 mRNA表達(dá)上調(diào)，而FasL mRNA表達(dá)下調(diào)。10、20、40mg／ml白英處理組和DDP組Fas／f~一actin光密度積分值之比分別為0．3 14+0．01 1、0．691+0．009和O．775~0．017，與正常對(duì)照組0．1 88+0．028相比有顯著差異(P<0．05，P<0．0 1)。caspase一8／9一actin光密度積分值之比分別為0-3

9、16+0．028、0．545~0．035和O．694~0．025，與正常對(duì)照組O．213~0．013相比有顯著差異(P

10、．020和0．274~0．023，與正常對(duì)照組O．727+0．015有明顯差異性(P/G<,1>期，抑制細(xì)胞增殖。 3.白英水提取液能上調(diào)Fas、caspase-8和caspase-3基因表