慢性心衰大鼠心肌MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及葶藶生脈方對(duì)其影響的研究.pdf

1、目的：葶藶生脈方（由紅參、葶藶子、五味子、麥冬、赤芍、生黃芪、益母草、丹參、紅花組成）具有益氣、活血、利水之功效，經(jīng)臨床觀察，對(duì)慢性心力衰竭具有較好療效。為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，參照相關(guān)文獻(xiàn)采用腹主動(dòng)脈縮窄法建立慢性心衰大鼠模型，并施加藥物干預(yù)，觀察葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心功能、心肌組織形態(tài)學(xué)、血清炎性細(xì)胞因子及心肌組織MMP-9、TIMP-1及CVF表達(dá)的影響，探討葶藶生脈方治療慢性心衰的部分作用機(jī)制。
　　 方法：

2、　　 第一部分葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心功能的影響
　　 1動(dòng)物分組
　　 健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重160～180g。隨機(jī)分為五組：假手術(shù)組、模型組、高劑量組、低劑量組、心寶組，每組12只。
　　 2模型建立
　　 適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，模型組、高劑量組、低劑量組、心寶組采用腹主動(dòng)脈縮窄法建立壓力超負(fù)荷慢性心衰模型，假手術(shù)組開腹后將手術(shù)絲線穿過(guò)腹主動(dòng)脈，不結(jié)扎。
　　 3實(shí)驗(yàn)給

3、藥
　　 葶藶生脈方（葶藶子、紅參、麥冬、五味子等組成）由河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥制劑室提供。心寶丸（規(guī)格：20粒/瓶，批號(hào)：20070631），汕頭市麒麟藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。造模4周后開始給藥，高劑量組、低劑量組給予葶藶生脈方灌胃，分別按30g/kg、15g/kg，心寶組給予心寶丸混懸液灌胃，0.24g/kg，假手術(shù)組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，1/d，連續(xù)8周。
　　 4檢測(cè)指標(biāo)
　　 給藥8周后，用20％烏

4、拉坦（1g/kg）腹腔注射麻醉，經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈插入導(dǎo)管至左心室，通過(guò)MS-4000U生物信號(hào)定量分析系統(tǒng)檢測(cè)大鼠左室收縮內(nèi)壓（LVSP）、左室舒張末壓（LVEDP）和左室內(nèi)壓最大變化速率（±dp/dtmax），測(cè)定心功能；切取少許左心室心肌組織，固定切片后，行HE染色，鏡下觀察心肌組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；采集大鼠動(dòng)脈血清，放射免疫法檢測(cè)TNF-α、IL-6。
　　 第二部分慢性心衰大鼠心肌MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及葶藶生脈方對(duì)

5、其影響的研究
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、用藥情況同前。連續(xù)灌胃8周，確定慢性心衰大鼠模型建立成功后，于最后1次給藥后禁食12h，麻醉動(dòng)物，切取少許左心室心肌組織，4％甲醛溶液中固定，24小時(shí)后將固定好的組織塊經(jīng)常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，采用免疫組化法檢測(cè)大鼠心肌MMP-9、TIMP-1表達(dá)，在Motic6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)下測(cè)定積分光密度值，半定量分析MMP-9、TIMP-1的表達(dá)。心肌組織切片行Masson染色，

6、鏡下觀察心肌膠原變化，并采用Motic6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)測(cè)定心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 所有數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，均用x±s表示，檢驗(yàn)以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心功能的影響
　　 1慢性心衰大鼠心功能的變化
　　 與假手術(shù)組（LVSP：144.46±3.2；+dp/dtmax

7、：11071.16±220.92，7597.79±55.040； LVEDP：1.7±0.98）比較：慢性心衰大鼠LVSP（109.46±2.14）和+dp/dtmax（5659.22±143.90，3141.07±37.31）顯著降低，LVEDP（12.8±3.45）升高，有顯著性差異（P<0.01）。
　　 2葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心功能的影響
　　 與心衰模型組（LVSP：109.46±2.14；4.dp/dtm

8、ax：5659.22±143.90，3141.07±37.31；LVEDP：12.8±3.45）比較：高劑量組、低劑量組大鼠LVSP（139.92±2.25，123.32±3.35）和+dp/dtmax（8519.13±144.76，6083.96±22.63；7340.54±65.85，4620.63±25.05）升高，LVEDP（2.0±0.58，2.0±0.9）降低，有顯著性差異（P<0.01或P<0.05）；其中高劑量組療效優(yōu)于

9、低劑量組和心寶組。
　　 3葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)的影響
　　 慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂，較正常心肌細(xì)胞明顯肥大，水腫，胞核濃染，間質(zhì)增生，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量組、低劑量組與心衰模型組比較，心肌細(xì)胞排列比較整齊，水腫明顯改善，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 4葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響
　　 與假手術(shù)組（TNF-α：0.649±0.034，IL-6：95.3

10、85±2.02）比較，模型組血清TNF-α（1.26±0.05）、IL-6（193.43±4.83）含量明顯升高（P<0.01）；高劑量組、低劑量組與模型組比較，血清TNF-α（0.76±0.03，0.94±0.13）、IL-6（193.43±4.83，128.85±2.075）降低，有顯著性差異（P<0.01）；與心寶組（0.98±0.05，166.87±4.88）比較，高劑量組優(yōu)于心寶組，有顯著性差異（P<0.01），低劑量組與心寶

11、組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 第二部分慢性心衰大鼠心肌MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及葶藶生脈方對(duì)其影響的研究
　　 葶藶生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心肌MMP-9、TIMP-1及CVF表達(dá)的影響
　　 與心衰模型組（MMP-9：0.187±0.011，TIMP-1：0.072±0.005：MMP-9/TIMP-1：2.026±0.100，CVF：18.61±0.87）比較，高劑量組、低劑量組大鼠心肌組織MMP

12、-9（0.096±0.007，0.133±0.007）表達(dá)下調(diào)，TIMP-1（0.136±0.003，0.113±0.004）表達(dá)上調(diào)，MMP-9/TIMP-1（0.915±0.221，1.196±0.079）下降，CVF（9.26±0.60，12.90±0.73）明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）；與心寶組（0.136±0.112，0.116±0.008，13.10±0.82）比較，高劑量組優(yōu)于心寶組，有顯著性差異（P<0.05或

13、P<0.01），低劑量組與心寶組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1大心肌組織MMP-9、TIMP-1表達(dá)異常，細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的過(guò)度分泌，共同參與心室重構(gòu)，致使心肌細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)形態(tài)、數(shù)量異常，心肌收縮力減弱，順應(yīng)性降低，導(dǎo)致大鼠慢性心衰。
　　 2具有益氣、活血、利水作用的葶藶生脈方通過(guò)抑制慢性心衰大鼠心肌組織MMP-9及細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)，上調(diào)TIMP-1的表達(dá)，調(diào)節(jié)MMP-