1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮類化合物的生物活性篩選及作用機(jī)理初步研究.pdf

1、姜黃素具有廣譜、良好的生物活性，但其存在溶解性差、易被氧化、吸收率低等缺點(diǎn)。目前，以姜黃素為先導(dǎo)化合物合成結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定、溶解性更好、活性更高的姜黃素衍生物已成為國際新藥開發(fā)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。 為了對(duì)姜黃素衍生物進(jìn)行農(nóng)藥、醫(yī)藥聯(lián)合開發(fā)，本論文以小麥赤霉病原菌(Fusarium graminearum)、辣椒枯萎病原菌(Fusarium oxysporum)、蘋果腐爛病原菌(Cytospora mandshurica)三個(gè)常見植物病

2、原菌作為供試對(duì)象，對(duì)本課題組合成的一系列結(jié)構(gòu)新穎的姜黃素衍生物進(jìn)行了殺菌活性篩選。另外也以雄性非依賴性前列腺癌細(xì)胞PC3、乳腺癌細(xì)胞Bcap37、胃癌細(xì)胞BGC823為模型對(duì)其進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選。同時(shí)以PC3細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑢?duì)姜黃素衍生物抗腫瘤細(xì)胞增殖機(jī)理進(jìn)行了初步研究，具體內(nèi)容包括：(1)以MTT法對(duì)化合物抑制PC3細(xì)胞增殖的時(shí)間、濃度效應(yīng)進(jìn)行了分析；(2)采用乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了化合物對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響；(3)利用

3、AO/EB染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了化合物的細(xì)胞毒性和誘導(dǎo)凋亡特性：(4)利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)了化合物對(duì)細(xì)胞核DNA的影響；(5)利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)化合物對(duì)兩個(gè)細(xì)胞周期蛋白激酶Cdk2和Cdk4磷酸化的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個(gè)具有良好抑菌活性的姜黃素衍生物05245(1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮)，其在500μg/mL濃度下對(duì)小麥赤霉病原菌、辣椒枯萎病原菌、蘋果腐爛病原菌三個(gè)植物病原菌的抑制率分別可達(dá)72.98％、71.

4、43％、79.23％。它也具有很好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性，其對(duì)PC3、BGC823、Bcap37三個(gè)腫瘤細(xì)胞系作用72 h的IC<,50>分別為1.78μM，2.90μM，4.08μM。另外，麻瘋樹提取物05279和酰腙衍生物cj-10也具有很好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性。為了使05245(1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮)的抗腫瘤細(xì)胞增殖機(jī)理具有可比性，本論文對(duì)三個(gè)化合物同時(shí)進(jìn)行了研究。MTT實(shí)驗(yàn)表明05245(1，5-二取代

5、苯基-1，4-戊二烯-3-酮)、05279、cj-10三個(gè)化合物都以濃度依賴方式抑制PC3細(xì)胞增殖；乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)表明三個(gè)化合物均對(duì)PC3細(xì)胞膜有損傷；AO/EB染色實(shí)驗(yàn)表明三個(gè)化合物對(duì)PC3細(xì)胞有毒性，但是熒光顯微鏡下沒有觀察到凋亡細(xì)胞；對(duì)PC3細(xì)胞DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)，三個(gè)化合物對(duì)PC3細(xì)胞沒有誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)；通過Western-blot對(duì)PC3細(xì)胞內(nèi)兩個(gè)調(diào)控細(xì)胞周期的重要蛋白激酶Cdk2和Cdk4磷酸化的分析表明，0