兩種小鼠恐懼記憶形成的差異與血皮質(zhì)醇水平及海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的 通過建立小鼠恐懼記憶能力的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，探索恐懼記憶形成后海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位表達(dá)的變化，從而尋找其分子作用機(jī)制。 方法 選用昆明種(KM)和C57BL/6小鼠，將足底電擊刺激的訓(xùn)練與聲音相結(jié)合，觀察同一品種小鼠用不同電擊強(qiáng)度以及不同品種小鼠用相同條件訓(xùn)練時(shí)，恐懼性記憶建立的差異。以訓(xùn)練后24 h測試時(shí)出現(xiàn)木僵反應(yīng)(stupor response)，作為恐懼性記憶形成的表現(xiàn)。以Flou-3/AM作

2、為熒光探針，用同源共聚焦顯微鏡測定腦片和培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化；取腦組織，冷凍切片，用免疫組化方法測定海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位及c-fos表達(dá)，高效液相色譜法測定血漿皮質(zhì)酮水平，將以上結(jié)果與行為學(xué)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 將聲音分別結(jié)合0.4mA、0.6mA、0.9mA足底電擊，24 h后在KM小鼠引出的木僵反應(yīng)時(shí)間分別為60.00±57.77s，110.00±129.61s，101.99±20.38s

3、，強(qiáng)度0.6mA組的合格率最高(30％)，組間比較無顯著性差異(P>0.05)。C57BL/6小鼠在聲音結(jié)合0.4mA電擊條件下，木僵反應(yīng)時(shí)間為275.62±36.99s，顯著長于KM小鼠的時(shí)間 (P<0.01)，其合格率為100％，遠(yuǎn)高于KM小鼠的7.69％(0.4mA)。KM小鼠對(duì)照組和訓(xùn)練組血漿發(fā)質(zhì)酮水平分別為(101.083±70.266)μg/L、(215.453±60.276)μg/L，兩者比較差異顯著(P<0.01)；訓(xùn)練

4、組血漿皮質(zhì)酮水平與訓(xùn)練結(jié)果木僵反應(yīng)時(shí)間(36.00±29.292)s之間無相關(guān)性(r=-0.273，P>0.05)。C57BL/6小鼠對(duì)照組和訓(xùn)練組血漿皮質(zhì)酮水平分別為(108.009±20.452)μg/L、(176.933±38.202)μg/L，兩者比較差異顯著(P<0.01)；訓(xùn)練組血漿皮質(zhì)酮水平與訓(xùn)練結(jié)果木僵反應(yīng)時(shí)間(257.50±36.450s)之間無相關(guān)性(r=-0.462，P>0.05)。兩種小鼠的對(duì)照組、訓(xùn)練組比較，均

5、為P>0.05，差異無顯著性意義。 C57BL/6小鼠訓(xùn)練組海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞c-fos表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，前者陽性細(xì)胞數(shù)平均值為185.18±31.131，后者為145.39±54.383；前者平均灰度值為12583.02±3543.554，后者為8436.851±3434.484，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P<0.01)。NR2B的檢測，陽性細(xì)胞數(shù)平均值訓(xùn)練組為(287.75±19.992)、對(duì)

6、照組為(254.26±31.897)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P<0.01)；前者平均灰度值為47703.90±11152.912，后者為39009.06±11586.680，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P<0.05)。 結(jié)論 ①C57BL/6小鼠在聲音70dB，0.4mA電刺激下，24h后恐懼木僵反應(yīng)時(shí)間滿足實(shí)驗(yàn)要求，成功率達(dá)95％以上；②血漿皮質(zhì)酮水平與訓(xùn)練成績無明顯相關(guān)性，但C67BL/6小鼠相關(guān)系數(shù)r為-