母鼠孕前應(yīng)激對(duì)新生子代血皮質(zhì)醇水平及海馬NCAM表達(dá)的影響.pdf

1、背景目的:
　　 母妊娠各期接受慢性不可預(yù)見性應(yīng)激（chronic unpredictable stress，CUS）將使胎兒血中皮質(zhì)醇水平升高，而胎兒暴露于高水平的皮質(zhì)醇環(huán)境中會(huì)導(dǎo)致大腦的組織結(jié)構(gòu)及分子生物學(xué)異常，其結(jié)果是子代出生后出現(xiàn)認(rèn)知和行為障礙。但是，目前有關(guān)研究還主要局限于妊娠期間母源性CUS對(duì)子代神經(jīng)發(fā)育的影響，對(duì)于妊娠前母經(jīng)歷CUS后短時(shí)間受孕是否會(huì)產(chǎn)生同樣的結(jié)果，還知之甚少。因此，本研究以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，觀察

2、孕前不同時(shí)期母鼠接受CUS后受孕所生子鼠7日齡時(shí)的血清皮質(zhì)醇水平和海馬神經(jīng)細(xì)胞粘附因子（neural cell adhesion molecule，NCAM）的表達(dá)，以此探討母孕前CUS是否會(huì)對(duì)子代血皮質(zhì)醇水平產(chǎn)生影響、及與大腦分子生物學(xué)異常的關(guān)系。
　　 材料和方法:
　　 經(jīng)開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和糖水消耗實(shí)驗(yàn)篩選出自主行為正常的雌性SD大鼠27只，隨機(jī)取15只使用11種刺激方法經(jīng)21天應(yīng)激建立CUS母鼠模型，另12只則為正常對(duì)照

3、母鼠。CUS模型母鼠以每組5只讓其在應(yīng)激后馬上、應(yīng)激后1周和應(yīng)激后2周與雄鼠合籠喂養(yǎng)。根據(jù)合籠時(shí)間把CUS母鼠分為CUS1組、CUS2組和CUS3組；正常對(duì)照母鼠則按每4只為一組，以與CUS母鼠相對(duì)應(yīng)的與雄鼠合籠時(shí)間分為正常對(duì)照1組（C1組）、正常對(duì)照2組（C2組）和正常對(duì)照3組（C3組）。然后再根據(jù)母鼠所屬分組，把CUS1組母鼠應(yīng)激后3-5天受孕所產(chǎn)子鼠對(duì)應(yīng)分為CUS1子鼠組，把CUS2組母鼠應(yīng)激后10-12天受孕所產(chǎn)子鼠分為CUS2

4、子鼠組，把CUS3組母鼠應(yīng)激后17-19天受孕所產(chǎn)子鼠分為CUS3子鼠組。按與各CUS母鼠組相對(duì)應(yīng)的受孕時(shí)間把正常對(duì)照組母鼠所生子鼠分為C1子鼠組、C2子鼠組、C3子鼠組。各子鼠組與對(duì)應(yīng)的母鼠組同籠喂養(yǎng)至7日齡時(shí)，每組隨機(jī)選同日齡雌子鼠8只、雄子鼠7只，將其斷頭取血，檢測(cè)血清皮質(zhì)醇水平；同時(shí)取腦分離海馬，然后固定包埋，制成石蠟切片，用免疫組化SABC法檢測(cè)海馬NCAM的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1．母鼠的自主行為評(píng)估在

5、開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，15只CUS母鼠在建立CUS模型前的總路程、周邊路程和中央路程與12只正常對(duì)照母鼠比，均無顯著差異（P>0.05）；在建立CUS模型后，15只CUS母鼠的三項(xiàng)指標(biāo)較12只正常對(duì)照明顯減少（P<0.01），而且建立CUS模型后三項(xiàng)指標(biāo)亦均短于自身模型建立前（P<0.01）。在糖水消耗試驗(yàn)中，15只CUS母鼠在建立CUS模型前總耗液量、糖水消耗量和糖水偏愛率與12只正常對(duì)照母鼠比，均無明顯差異（P＞0.05）；在建立CUS模型后

6、，15只CUS母鼠的糖水消耗量及糖水偏愛率明顯低于12只正常對(duì)照和自身模型建立前（P<0.01）；總液體消耗量則無差異（P>0.05）。
　　 2. CUS子鼠血清皮質(zhì)醇檢測(cè)結(jié)果血清皮質(zhì)醇濃度在CUS1子鼠組與C1子鼠組分別為（117.64±30.84）ng/ml和（83.68±36.63）ng/ml，CUS1子鼠組高于C1子鼠組（P<0.05）；CUS2子鼠組與C2子鼠組分別為（108.04±30.84）ng/ml和（82.8

7、4±28.14）ng/ml，CUS2子鼠組亦高于C2子鼠組（P<0.05）；CUS3子鼠組與C3子鼠組分別為（106.30±30.56）ng/ml和（86.62±28.91）ng/ml，兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3. 子鼠海馬的NCAM表達(dá) CUS1子鼠組、CUS2子鼠組和CUS3子鼠組平均光密度值分別為0.014±0.010、0.072±0.011和0.218±0.090；C1子鼠組、 C2子鼠組、和C3

8、子鼠組分別為0.223±0.069、0.226±0.081和0.223±0.080，CUS1子鼠組明顯低于C1子鼠組、CUS2子鼠組明顯低于C2子鼠組（P<0.01），而CUS3子鼠組與C3子鼠組間無顯著差異（P>0.05）。此外， CUS1子鼠組、CUS2子鼠組海馬的NCAM表達(dá)較CUS3組明顯下調(diào)，且下調(diào)強(qiáng)度CUS1子鼠組>CUS2子鼠組，CUS1、CUS2和CUS3子鼠組間NCAM的平均光密度值亦有顯著差異（P<0.01）。

9、>　　 結(jié)論:
　　 1．在開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，母鼠孕前接受CUS后活動(dòng)度下降，對(duì)環(huán)境的好奇程度下降，表現(xiàn)出抑郁行為；蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)則顯示，經(jīng)歷CUS的母鼠對(duì)獎(jiǎng)賞的敏感性降低，快感缺失。因此，本研究成功建立了孕前CUS母鼠模型。
　　 2．CUS1和CUS2子鼠組7日齡時(shí)的血皮質(zhì)醇水平明顯高于對(duì)應(yīng)的C1和C2對(duì)照組，可見母鼠孕前接受CUS后短期受孕將使子鼠暴露于高水平的皮質(zhì)醇環(huán)境中，影響子鼠的大腦發(fā)育。
　　 3．母鼠