母鼠孕前應激對新生子代血皮質(zhì)醇水平及海馬NCAM表達的影響.pdf

1、背景目的:
　　 母妊娠各期接受慢性不可預見性應激（chronic unpredictable stress，CUS）將使胎兒血中皮質(zhì)醇水平升高，而胎兒暴露于高水平的皮質(zhì)醇環(huán)境中會導致大腦的組織結構及分子生物學異常，其結果是子代出生后出現(xiàn)認知和行為障礙。但是，目前有關研究還主要局限于妊娠期間母源性CUS對子代神經(jīng)發(fā)育的影響，對于妊娠前母經(jīng)歷CUS后短時間受孕是否會產(chǎn)生同樣的結果，還知之甚少。因此，本研究以SD大鼠為實驗動物，觀察

2、孕前不同時期母鼠接受CUS后受孕所生子鼠7日齡時的血清皮質(zhì)醇水平和海馬神經(jīng)細胞粘附因子（neural cell adhesion molecule，NCAM）的表達，以此探討母孕前CUS是否會對子代血皮質(zhì)醇水平產(chǎn)生影響、及與大腦分子生物學異常的關系。
　　 材料和方法:
　　 經(jīng)開場實驗和糖水消耗實驗篩選出自主行為正常的雌性SD大鼠27只，隨機取15只使用11種刺激方法經(jīng)21天應激建立CUS母鼠模型，另12只則為正常對照

3、母鼠。CUS模型母鼠以每組5只讓其在應激后馬上、應激后1周和應激后2周與雄鼠合籠喂養(yǎng)。根據(jù)合籠時間把CUS母鼠分為CUS1組、CUS2組和CUS3組；正常對照母鼠則按每4只為一組，以與CUS母鼠相對應的與雄鼠合籠時間分為正常對照1組（C1組）、正常對照2組（C2組）和正常對照3組（C3組）。然后再根據(jù)母鼠所屬分組，把CUS1組母鼠應激后3-5天受孕所產(chǎn)子鼠對應分為CUS1子鼠組，把CUS2組母鼠應激后10-12天受孕所產(chǎn)子鼠分為CUS2

4、子鼠組，把CUS3組母鼠應激后17-19天受孕所產(chǎn)子鼠分為CUS3子鼠組。按與各CUS母鼠組相對應的受孕時間把正常對照組母鼠所生子鼠分為C1子鼠組、C2子鼠組、C3子鼠組。各子鼠組與對應的母鼠組同籠喂養(yǎng)至7日齡時，每組隨機選同日齡雌子鼠8只、雄子鼠7只，將其斷頭取血，檢測血清皮質(zhì)醇水平；同時取腦分離海馬，然后固定包埋，制成石蠟切片，用免疫組化SABC法檢測海馬NCAM的表達。
　　 結果:
　　 1．母鼠的自主行為評估在

5、開場實驗中，15只CUS母鼠在建立CUS模型前的總路程、周邊路程和中央路程與12只正常對照母鼠比，均無顯著差異（P>0.05）；在建立CUS模型后，15只CUS母鼠的三項指標較12只正常對照明顯減少（P<0.01），而且建立CUS模型后三項指標亦均短于自身模型建立前（P<0.01）。在糖水消耗試驗中，15只CUS母鼠在建立CUS模型前總耗液量、糖水消耗量和糖水偏愛率與12只正常對照母鼠比，均無明顯差異（P＞0.05）；在建立CUS模型后

6、，15只CUS母鼠的糖水消耗量及糖水偏愛率明顯低于12只正常對照和自身模型建立前（P<0.01）；總液體消耗量則無差異（P>0.05）。
　　 2. CUS子鼠血清皮質(zhì)醇檢測結果血清皮質(zhì)醇濃度在CUS1子鼠組與C1子鼠組分別為（117.64±30.84）ng/ml和（83.68±36.63）ng/ml，CUS1子鼠組高于C1子鼠組（P<0.05）；CUS2子鼠組與C2子鼠組分別為（108.04±30.84）ng/ml和（82.8

7、4±28.14）ng/ml，CUS2子鼠組亦高于C2子鼠組（P<0.05）；CUS3子鼠組與C3子鼠組分別為（106.30±30.56）ng/ml和（86.62±28.91）ng/ml，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 3. 子鼠海馬的NCAM表達 CUS1子鼠組、CUS2子鼠組和CUS3子鼠組平均光密度值分別為0.014±0.010、0.072±0.011和0.218±0.090；C1子鼠組、 C2子鼠組、和C3

8、子鼠組分別為0.223±0.069、0.226±0.081和0.223±0.080，CUS1子鼠組明顯低于C1子鼠組、CUS2子鼠組明顯低于C2子鼠組（P<0.01），而CUS3子鼠組與C3子鼠組間無顯著差異（P>0.05）。此外， CUS1子鼠組、CUS2子鼠組海馬的NCAM表達較CUS3組明顯下調(diào)，且下調(diào)強度CUS1子鼠組>CUS2子鼠組，CUS1、CUS2和CUS3子鼠組間NCAM的平均光密度值亦有顯著差異（P<0.01）。

9、>　　 結論:
　　 1．在開場實驗中，母鼠孕前接受CUS后活動度下降，對環(huán)境的好奇程度下降，表現(xiàn)出抑郁行為；蔗糖水消耗實驗則顯示，經(jīng)歷CUS的母鼠對獎賞的敏感性降低，快感缺失。因此，本研究成功建立了孕前CUS母鼠模型。
　　 2．CUS1和CUS2子鼠組7日齡時的血皮質(zhì)醇水平明顯高于對應的C1和C2對照組，可見母鼠孕前接受CUS后短期受孕將使子鼠暴露于高水平的皮質(zhì)醇環(huán)境中，影響子鼠的大腦發(fā)育。
　　 3．母鼠