TNF-α誘導(dǎo)fgl2表達(dá)在心臟微循環(huán)障礙的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分缺血再灌注大鼠心肌中TNF-α與fgl2表達(dá)的研究
　　目的:大量的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)研究了TNF-α在心肌缺血再灌注中的作用。但是TNF-α在缺血再灌注微循環(huán)障礙中的作用還不明確。我們通過檢測(cè)大鼠缺血再灌注中TNF-α和fgl2的表達(dá)量來明確在動(dòng)物模型中fgl2的表達(dá)與TNF-α是否有關(guān)。
　　方法:建立大鼠缺血再灌注模型,將大鼠分為假手術(shù)組,缺血再灌注1天組,3天組,7天組。另外設(shè)立TNF-α中和性抗體干預(yù)組,并設(shè)立假手術(shù)

2、組+TNF-α中和性抗體組、缺血再灌注+非免疫性抗體組作為對(duì)照。將大鼠心臟左前降支(LAD)結(jié)扎30分鐘,給予1天,3天,7天不同再灌注。用Evans和TTC雙染法確定心肌梗死面積。用Westernblot方法檢測(cè)TNF-α和fgl2的表達(dá)量。TNF-α中和性抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)中,缺血再灌注前3小時(shí)腹腔內(nèi)注射TNF-α中和性抗體,觀察fgl2的表達(dá)量。
　　結(jié)果:缺血再灌注3天組的大鼠梗死面積明顯大于1天組,和7天組。大鼠缺血再灌注后T

3、NF-α和fgl2表達(dá)升高,TNF-α和fgl2蛋白在缺血再灌注3天組中表達(dá)量明顯比1天組和7天組高,當(dāng)TNF-α被TNF-α中和性抗體中和后,fgl2蛋白表達(dá)量下降。
　　結(jié)論:大鼠缺血再灌注后心肌組織TNF-α和fgl2的表達(dá)升高,fgl2的表達(dá)升高可能與TNF-α表達(dá)升高有關(guān)。
　　第二部分促炎因子TNF-α對(duì)大鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞fgl2表達(dá)影響的研究
　　目的:心肌缺血再灌注損傷病理生理機(jī)制復(fù)雜,促炎因子TNF-

4、α在心肌缺血再灌注損傷中起著關(guān)鍵作用,并且微循環(huán)障礙在心肌缺血再灌注損傷中具有重要影響,本實(shí)驗(yàn)通過研究TNF-α對(duì)大鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞fgl2表達(dá)的影響來探索心肌缺血再灌注微循環(huán)障礙中微血栓形成的機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)大鼠原代心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,用TNF-α不同的濃度(12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/ml)刺激細(xì)胞24小時(shí),用25ng/mL的TNF-α刺激不同的時(shí)間(12小時(shí),24小時(shí),48小時(shí)),用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)

5、fgl2mRNA表達(dá)水平,用激光共聚焦和Westernblot檢測(cè)fgl2蛋白表達(dá)。用凝血酶生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)被TNF-α刺激后大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的促凝活性。
　　結(jié)果:TNF-α刺激后大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞后,fgl2mRNA和蛋白表達(dá)升高,相應(yīng)地,微血管內(nèi)皮細(xì)胞促凝血酶生成活性增加。激光共聚焦檢測(cè)表明fgl2表達(dá)在微血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜上。
　　結(jié)論:TNF-α可以刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)fgl2,并促進(jìn)凝血酶的生成。

6、這可能是大鼠缺血再灌注微循環(huán)障礙中原位微血栓形成的原因之一。
　　第三部分TNF-α誘導(dǎo)大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞fgl2表達(dá)信號(hào)通路機(jī)制的研究
　　目的:大量實(shí)驗(yàn)研究表明NF-kB和p38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路參與了缺血再灌注損傷,但是NF-kB和p38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路在大鼠缺血再灌注微循環(huán)障礙中的作用并不完全清楚,本實(shí)驗(yàn)研究探索大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞中TNF-α誘導(dǎo)fgl2表達(dá)信號(hào)通路機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)大鼠原代心

7、肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,用NF-kB特異性抑制劑PDTC(50μmol/l)、p38MAPK特異性抑制劑SB203580(10μmol/l)預(yù)孵育大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞1小時(shí),然后用TNF-α(25ng/ml)刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞24h。Westernblot檢測(cè)fgl2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:預(yù)孵育PDTC(50μmol/l)1小時(shí)后,TNF-α誘導(dǎo)的大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞fgl2表達(dá)明顯減少。預(yù)孵育SB203580(10μm