姜黃素對AGEs誘導軟骨細胞TNF-α及MMP-13表達的抑制作用及機制探討.pdf

1、目的：以外源性糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)為損傷因子，在體外培養(yǎng)的家兔軟骨細胞模型上，觀察姜黃素(Curcumin)對AGEs誘導的軟骨細胞TNF-α和MMP-13表達的影響，并探討其相關機制。
　　 方法：在原代培養(yǎng)的家兔軟骨細胞模型上，(1)觀察不同濃度的AGEs對軟骨細胞TNF-α和MMP-13 mRNA的表達的影響，并探討相關機制，實驗分為7組：①正常對照組；

2、②BSA(100μg/ml)對照組；③AGEs(1μg/ml)處理組；④AGEs(10μg/ml)處理組；⑤AGEs(25μg/ml)處理組；⑥AGEs(50μg/ml)處理組；⑦AGEs(100μg/ml)處理組。采用RT-PCR方法檢測TNF-α和MMP-13mRNA的表達量，試劑盒方法檢測CAT、SOD活性及MDA水平。(2)觀察不同濃度的Curcumin對AGEs誘導軟骨細胞TNF-α和MMP-13 mRNA表達的影響，并探討相

3、關機制。實驗分為7組：①正常對照組；②BSA(100μg/ml)對照組；③AGEs(100μg/ml)處理組；④AGEs(100μg/ml)＋curcumin(10μmol/L)處理組；⑤AGEs(100μg/ml)＋curcumin(25μmol/L)處理組；⑥AGEs(100μg/ml)＋curcumin(50μmol/L)處理組；⑦curcumin(50μmol/L)對照組。采用RT-PCR方法檢測TNF-α和MMP-13 mRN

4、A的表達量，熒光探針法檢測ROS水平和NF-кBP65的核轉(zhuǎn)位。
　　 結(jié)果：⑴不同濃度的AGEs(1,10,25,50,100μg/ml)與軟骨細胞共孵育48h后，TNF-α及MMP-13 mRNA的表達較正常對照組明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，且均以AGEs濃度為100μg/ml時作用最明顯；⑵Anti-RAGE(5μg/ml)與PDTC(0.1mmol/L)能顯著抑制由AGEs(100μg/ml)誘導的軟骨細胞T

5、NF-α及MMP-13表達增多(P＜0.01)，而anti-RAGE(5μg/ml)和PDTC(0.1mmol/L)單獨處理組與正常對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；⑶10,25,50μmol/L的Curcumin與軟骨細胞預孵育2h后，可以濃度依賴性的抑制由AGEs誘導的TNF-α及MMP-13mRNA增多(P＜0.05或P＜0.01)，且均以50μmol/L的Curcumin作用最為明顯，與AGEs處理組相比，使TNF-

6、α/GAPDH OD比值從1.38±0.04降至0.61±0.02(P＜0.01)；MMP-13/GAPDH OD比值從0.79±0.04降至0.31±0.02(P＜0.01)，而50μmol/L Curcumin單獨對照組與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；⑷不同濃度的AGEs(1,10,25,50,100μg/ml)與軟骨細胞共孵育48h后，濃度依賴性地使軟骨細胞CAT，SOD活性降低，MDA含量增多，與正常對照組相比

7、差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)；10,25,50μmol/L的Curcumin與軟骨細胞預孵育2h后，濃度依賴性的拮抗由AGEs所致細胞CAT、SOD活性降低及MDA水平增高(P＜0.05或P＜0.01)，且均以50μmol/LCurcumin作用最明顯，與AGEs100μg/ml處理組相比，使CAT活性從2.36±0.31升至11.15±0.52(P＜0.01)，SOD活性從6.88±0.48升至22.01±0.62(

8、P＜0.01),MDA的水平由1.98±0.07降至0.66±0.0(P＜0.01)；⑸10,25,50μmol/L的Curcumin能夠濃度依賴性地降低軟骨細胞中ROS的含量，50μmol/L的Curcumin作用最明顯，與AGEs100μg/ml處理組相比，OD值從0.39±0.009降至0.13±0.005(P＜0.01)；且Curcumin能夠顯著抑制AGEs誘導的軟骨細胞NF-кB P65的核轉(zhuǎn)位。
　　 結(jié)論：①AG