納米鐵氧體—?dú)ぞ厶恰ń槊鐝?fù)合物的制備及抗膀胱腫瘤作用的研究.pdf

1、研究目的:以殼聚糖溫敏凝膠為載體,制備一種新型的搭載納米鐵氧體、卡介苗的復(fù)合物,構(gòu)建卡介苗的靶向粘附釋放系統(tǒng),對(duì)其表征進(jìn)行檢測(cè),并研究其在膀胱內(nèi)的生物靶向粘附性、生物學(xué)毒性及在動(dòng)物模型中抗腫瘤誘導(dǎo)效應(yīng),探討其在膀胱內(nèi)對(duì)卡介苗的增效作用。
　　研究方法:1.Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物的構(gòu)建:采用化學(xué)共沉淀法制備納米鐵氧體作為復(fù)合制劑的磁性牽引物,以殼聚糖為基質(zhì)制備具有粘膜粘附性的溫敏凝膠作為卡介苗的載體,最終將納米鐵氧體、殼聚糖

2、及卡介苗相融合,構(gòu)建出卡介苗靶向粘附釋放系統(tǒng),通過IR、XRD、SEM、TEM及VSM等對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行分析。
　　2.Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物的生物學(xué)活性的檢測(cè):在外加磁場(chǎng)的條件下,采用冰凍切片方式驗(yàn)證復(fù)合物在大鼠膀胱內(nèi)的靶向粘附性;選取IL-2為指標(biāo)評(píng)價(jià)復(fù)合物在膀胱灌注后的局部免疫活性;觀察其全身毒性反應(yīng)。
　　3.Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物抗膀胱腫瘤誘導(dǎo)作用的研究:建立大鼠膀胱癌MNU誘導(dǎo)模型,利用Fe3O4

3、-CS-BCG復(fù)合物進(jìn)行膀胱灌注,拮抗其腫瘤誘導(dǎo)效應(yīng),通過檢測(cè)尿液中TRAIL的濃度、對(duì)腫瘤組織進(jìn)行HE染色及Ki67免疫組化染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤凋亡等方法評(píng)估其抗腫瘤誘導(dǎo)效應(yīng)。
　　研究結(jié)果:1.合成的Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物呈灰黑色,凝膠狀。電鏡下觀察,卡介苗及納米鐵氧體駐留于殼聚糖的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)中,形態(tài),性質(zhì)穩(wěn)定?？ń槊缂凹{米鐵氧體裝載后復(fù)合物仍具有磁響應(yīng)性,磁性靶向作用良好。
　　2.冰凍切片下觀察,復(fù)合物在

4、磁場(chǎng)作用下與膀胱壁粘附緊密,在膀胱內(nèi)的滯留時(shí)間可達(dá)72小時(shí);復(fù)合物膀胱灌注后IL-2濃度呈逐漸升高態(tài)勢(shì),膀胱內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)強(qiáng)于普通卡介苗,免疫活性高;應(yīng)用后各組大鼠肝腎功、血常規(guī)等指標(biāo)未見明顯異常,心肝腎病理檢查未見明顯病理損害,證明其全身毒性反應(yīng)較小,應(yīng)用較安全。
　　3.在抗大鼠膀胱腫瘤誘導(dǎo)的研究中,大鼠灌注Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物后,尿液中TRAIL濃度較普通卡介苗組明顯升高,所誘導(dǎo)出的腫瘤分級(jí)及增殖程度較低,而腫瘤凋

5、亡率較高,各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物較普通卡介苗具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性。
　　研究結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)中成功制備以殼聚糖為載體、以納米鐵氧體為磁性牽引物的。Fe3O4-CS-BCG復(fù)合物,經(jīng)檢測(cè)性質(zhì)穩(wěn)定,磁響應(yīng)性較好;在外加磁場(chǎng)作用下,可在大鼠膀胱內(nèi)產(chǎn)生明顯的靶向粘附作用,時(shí)間長(zhǎng)達(dá)72小時(shí),延長(zhǎng)了卡介苗在膀胱內(nèi)的作用時(shí)間;與普通卡介苗相比,同等劑量條件下可較普通卡介苗在膀胱內(nèi)產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫作用;應(yīng)用后全身毒性反應(yīng)較