殼聚糖及烷基化殼聚糖-DNA復合物介導的基因轉染研究.pdf

1、該文主要研究了殼聚糖及烷基化殼聚糖/DNA聚電解質復合物的性質以及此復合物介導的基因轉染,主要內容包括以下三個方面:(1)以多種手段對殼聚糖及其烷基化衍生物/DNA復合物進行研究.通過紅外光譜、31P NMR譜、圓二色譜和熒光光譜的分析得知,DNA在與殼聚糖形成聚電解質復合物時只是引起DNA價鍵的微小擾動,DNA仍保持B型構象,部分殼聚糖結合到DNA的小溝區(qū)域.對CS/DNA復合物的AFM的觀測表明,殼聚糖/DNA復合物的拓撲結構因電荷

2、比的不同而異,在低殼聚糖/DNA電荷比時,仍然存在自由DNA,較高電荷比下,可形成納米尺度的顆粒.以二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)為模擬細胞膜,通過原子力顯微鏡和差示掃描量熱法(DSC)測定烷基化殼聚糖與模擬胞膜的相互作用,探索載體的跨細胞膜機制.結果表明,殼聚糖和烷基化殼聚糖均能夠引起DPPC膜的擾動.對于烷基化殼聚糖,隨著疏水性的提高,膜擾動效應增強.復合物的電泳分析和DNase降解實驗揭示,與殼聚糖相比,少量的烷基化殼聚糖可與DN

3、A形成復合物,且同樣起到保護DNA免受酶解的作用.(2)以C2C12小鼠成肌細胞為宿主細胞,以殼聚糖和烷基化殼聚糖為載體,介導含CAT報告基因的轉染,通過細胞酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定表達CAT的含量以確定基因轉染效率,考察疏水烷基鏈的引入對轉染率的影響.結果表明,殼聚糖和烷基化殼聚糖可成功地將pcDNA3.1/CAT質粒轉入C2C12細胞內,殼聚糖基載體的轉染率比裸DNA轉染率高4倍,而烷基化殼聚糖的轉染率隨著烷基鏈的延長進一