葉酸-殼聚糖介導的Survivin shRNA基因納米復合物的研制.pdf

1、目的：制備葉酸-殼聚糖（Folate-coupled Chitosan）納米粒，并研究其作為survivin shRNA重組質粒載體傳遞系統(tǒng)的可行性以及對肝癌細胞的轉染效率的檢測。為研究肝癌RNAi介導的基因治療打下基礎。 方法：在本研究中，通過葉酸活性脂與殼聚糖上的氨基反應，使葉酸與殼聚糖偶聯(lián)。將異硫氰基熒光素與葉酸偶聯(lián)殼聚糖進行化學嫁接，以離子交聯(lián)法制成具有熒光的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒。并與肝癌HepG2細胞進行體外細胞實驗。

2、然后將20μg/mL survivin shRNA重組質粒和10μg/mL葉酸-殼聚糖混合制備基因納米復合物并檢測其理化性質，同時以陽離子脂質體基因復合物作為對照，將上述兩者轉染肝癌細胞，測定其轉染效率，Western blotting檢測轉染后腫瘤細胞中survivin蛋白的表達。 結果：實驗結果顯示葉酸活性酯用量和反應溫度及試劑滴加速度是影響偶聯(lián)比的主要因素。在葉酸活性酯與殼聚糖用量比為1：1，反應溫度（30℃），滴加速度（

3、2mL/min），反應時間為12 h的條件下可得到偶聯(lián)穩(wěn)定的葉酸偶聯(lián)殼聚糖。所制得的納米粒粒徑140nm，原子力顯微鏡下觀察其形態(tài)規(guī)則，細胞熒光效果明顯。實驗成功制備葉酸-殼聚糖介導的Survivin shRNA基因納米復合物。該基因納米復合物轉染肝癌細胞的效果強于陽離子脂質體基因復合物。且轉染后肝癌細胞survivin蛋白的表達顯著陽離子脂質體基因復合物。 結論：采用離子交聯(lián)法，優(yōu)化工藝條件，成功制備粒徑較小、分布均勻的具有熒