左旋咪唑增強(qiáng)金黃色葡萄球菌凝集因子A亞單位疫苗免疫效果的研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌是一種條件致病菌，能引起多種嚴(yán)重疾病。由于抗生素治療金黃色葡萄球菌疾病產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性，開(kāi)發(fā)金黃色葡萄球菌疫苗已迫在眉睫，其中亞單位蛋白疫苗在金黃色葡萄球菌疾病預(yù)防中居于重要地位。但由于蛋白疫苗在激活細(xì)胞免疫應(yīng)答水平有限，目前，篩選合適的能增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答的佐劑來(lái)加強(qiáng)亞單位蛋白疫苗的免疫效果是一種新型的免疫策略。左旋咪唑（Levamisole，LMS）是一種低分子量的化合物，且能夠激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。同時(shí)金黃色葡萄球菌

2、凝集因子A(Clumping factorA，ClfA)是金黃色葡萄球菌重要的黏附因子，被認(rèn)為是開(kāi)發(fā)新型疫苗的理想候選抗原。本實(shí)驗(yàn)將左旋咪唑作為佐劑與金黃色葡萄球菌亞單位疫苗ClfA共同免疫小鼠，觀察其是否能夠增強(qiáng)金黃色葡萄球菌蛋白疫苗的免疫效果。
　　實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)ClfA活性片段進(jìn)行擴(kuò)增，構(gòu)建pGEX-4T-1-ClfA重組原核表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21(DE3)內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE與Western Blot對(duì)重組

3、蛋白進(jìn)行分析鑒定。重組蛋白經(jīng)過(guò)純化后，與LMS進(jìn)行配伍免疫小鼠，ELISA法檢測(cè)免疫后血清抗體IgG及其亞型IgG1和IgG2a的滴度;CFSE染色法檢測(cè)T細(xì)胞增殖活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+-IFN-γ、CD4+-IL-17和CD8+-IFN-γ細(xì)胞分度，ELISA法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞上清中IFN-γ、IL-4和IL-17A細(xì)胞因子的分泌量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，左旋咪唑作為佐劑與亞單位疫苗ClfA共同免疫小鼠后，LMS+ClfA組抗

4、體效價(jià)最高、且與ClfA組相比差異顯著(P＜0.05)，分析IgG抗體各亞型，發(fā)現(xiàn)ClfA組IgG抗體亞型主要以IgG1為主;LMS+ClfA組抗體形式以IgG2a為主;脾臟淋巴細(xì)胞上清細(xì)胞因子檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，LMS+ClfA組與ClfA組相比，細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17A分泌量升高，差異顯著(P＜0.05)。在胞內(nèi)細(xì)胞因子染色實(shí)驗(yàn)中，LMS+ClfA組CD4+T細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)量升高，與單獨(dú)免疫ClfA組相比，二者差異顯著(P＜0.