α-synuclein對星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)—高爾基體系統(tǒng)及凋亡的影響.pdf

1、目的:研究過表達(dá)α-synuclein野生型和突變型(A53T、A30P)對星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，AST)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基系統(tǒng)及細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:分離培養(yǎng)和純化新生1-3天SD大鼠皮質(zhì)區(qū)的AST，用免疫熒光的方法對其進(jìn)行鑒定（GFAP），Western blot檢測AST內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。用293FT細(xì)胞對前期已經(jīng)構(gòu)建好的(WT、A30P、A53T)α-synuclein-HA-FUIG W-

2、GFP、GFP-fuigw質(zhì)粒進(jìn)行慢病毒包裝，收獲病毒上清后分別感染AST，分為過表達(dá)野生型組（WT組）、A30P組、A53T組和對照組（FUIGW組）。5-7天后免疫熒光及Western blot檢測AST中(WT、A30P、A53T)α-synuclein-HA融合蛋白的表達(dá)。衣霉素處理AST6小時(shí)作為陽性對照組，Western blot檢測各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)蛋白BIP、CHOP的變化;免疫熒光檢測各組GM130觀察高爾基體形態(tài)的變

3、化;流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率的變化。
　　結(jié)果:1）星形膠質(zhì)細(xì)胞有內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。
　　2)慢病毒感染AST5-7天后免疫熒光及Western blot可檢測到過表達(dá)野生型組（WT組）、A30P組、A53T組α-synuclein-HA融合蛋白的表達(dá)，而FUIGW組未檢測到α-synuclein-HA融合蛋白的表達(dá)。
　　3)過表達(dá)野生型組（WT組）、A30P組、A53T組BIP、CHOP指標(biāo)明

4、顯高于對照組（FUIGW組）(P＜0.05);過表達(dá)野生型組（WT組）與A30P組、A53T組相比BIP、CHOP表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4)過表達(dá)野生型組（WT組）與A30P組、A53T組的高爾基體分散在細(xì)胞質(zhì)中，囊泡碎裂;對照組（FUIGW組）高爾基體分布在細(xì)胞核一側(cè)，囊泡完整無碎裂。經(jīng)x2檢驗(yàn)，過表達(dá)野生型組（WT組）、A30P組、A53T組的高爾基體碎裂百分比明顯高于對照組（FUIGW組）(P＜0.01);

5、過表達(dá)野生型組（WT組）與A30P組、A53T組的高爾基體碎百分比差異無顯著性（P＞0.05）。
　　5)過表達(dá)野生型組（WT組）、A30P組、A53T組的AST凋亡率明顯高于對照組（FUIGW組）(P＜0.01);過表達(dá)野生型組（WT組）與A30P組、A53T組的AST凋亡率差異無顯著性（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　過表達(dá)α-synuclein野生型和突變型(A53T、A30P)可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體系統(tǒng)損傷