α-synuclein對星形膠質(zhì)細胞分泌GDNF及調(diào)控神經(jīng)元軸突生長的影響.pdf

1、目的:研究過表達α-synuclein野生型和突變體(A30P、A53T)對星形膠質(zhì)細胞(astrocyte，AST)分泌膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glia-derived neurotrophic factor，GDNF)的影響，以及對神經(jīng)元的軸突生長的影響。
　　方法:分離純化新生1-3天的雄性大鼠皮質(zhì)區(qū)AST和新生24小時內(nèi)的雄性大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元，Western blot檢測AST中內(nèi)源性α-synuclein的表達。用293FT

2、細胞對前期已構(gòu)建好的α-synuclein(WY/MU)-HA-FUIGW-GFP及FUIGW-GFP慢病毒載體進行包裝，收獲的病毒上清在體外感染原代培養(yǎng)的AST，分為Fuigw組、WT組、A30P組及A53T組，其中Fuigw組為空白對照組。使用免疫熒光染色及Western blot檢測AST中野生型及突變型α-synuclein的表達后，酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorben assay，ELISA)

3、檢測各組轉(zhuǎn)染后AST培養(yǎng)上清中GDNF水平;用Transwell培養(yǎng)皿將感染后的AST與分離純化的神經(jīng)元進行共培養(yǎng)，，免疫熒光染色觀察共培養(yǎng)的神經(jīng)元軸突長度的變化。
　　結(jié)果:
　　1.原代培養(yǎng)的AST中存在內(nèi)源性α-synuclein的表達。
　　2.免疫熒光染色和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)感染后各組ASTα-synuclein(WT)-HA、α-synuclein(A30P)-HA、α-synuclein(A

4、53T)-HA成功表達。
　　3.酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測發(fā)現(xiàn)WT組、A30P組、及A53T組的培養(yǎng)上清中GDNF濃度均低于FUIGW組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)WT組、A30P組及A53T組的神經(jīng)元突起長度均較FUIGW組短，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　過表達野生型及突變型(A30P、A53T)α-synuclein的星形膠質(zhì)細胞分泌GDNF減少，可