積雪草酸對高糖培養(yǎng)腎小球系膜細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響.pdf

1、目的:觀察積雪草酸(Asiatic Acid，AA)對高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞(HBZY-1)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)PERK改變及其介導(dǎo)的Nrf2的表達和相關(guān)抗氧化酶系SOD和CAT活性的影響，以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡蛋白CHOP、Caspase-12的改變，探討積雪草酸對糖尿病腎病腎臟保護的分子生物學(xué)機制。
　　方法:體外培養(yǎng)HBZY-1，隨機分為五組:高糖對照組（A組）、高糖加AA30μmol/L（B組）、高糖加AA60μmol/L（C組）、高糖加

2、AA90μmol/L（D組）和空白對照組(E組)。分別培養(yǎng)12小時、24小時、48小時后，采用分光光度計比色法檢測各組細胞培養(yǎng)液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD.)和過氧化氫酶(Catalase，CAT)的活力，RT-PCR法檢測各組細胞中PERK mRNA的表達，流式細胞儀法檢測各組細胞的凋亡水平，Western Blot法分別檢測各組細胞中蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PKR-like ERkinase，P

3、ERK)、磷酸化PERK(P-PERK)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein，CHOP)、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶12(Cysteine containing aspartate specificproteases12，Caspase-12)和核因子NF-E2相關(guān)因子(NF-E2-related factor2，Nrf2)的蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.HBZY-1培養(yǎng)液中SOD、CA

4、T的活力:與E組相比，12、24和48小時的A組SOD、CAT活力下降(P＜0.05）;與A組相比，12小時的C、D組和24、48小時的B、C、D組SOD、CAT活力增加(P＜0.05）。上述變化可見濃度依賴性。
　　2.HBZY-1中Nrf2蛋白表達的變化:與E組相比，12、24和48小時的A組Nrf2蛋白表達下降(P＜0.05）;與A組相比，12小時的C、D組和24、48小時的B、C、D組Nrf2蛋白表達增加(P＜0.05）。

5、上述變化可見濃度依賴性。
　　3.HBZY-1中PERK mRNA、PERK蛋白的表達水平:與E組相比，12、24和48小時的A組PERK mRNA、PERK蛋白表達下降(P＜0.05）;與A組相比，12小時的C、D組和24、48小時的B、C、D組PERK mRNA、PERK蛋白表達增加(P＜0.05）。上述變化可見濃度依賴性。
　　4.HBZY-1中P-PERK、CHOP蛋白表達的變化:與E組相比，12、24和48小時的A

6、組P-PERK、CHOP蛋白表達增加(P＜0.05）;與A組相比，12小時的C、D組和24、48小時的B、C、D組P-PERK、CHOP蛋白表達降低（P＜0.05）。上述變化可見濃度依賴性。
　　5.流式細胞儀測各組HBZY-1凋亡水平:與E組相比，12、24和48小時的A組細胞凋亡率增加(P＜0.05）;與A組相比，12小時的C、D組和24、48小時的B、C、D組細胞凋亡率降低(P＜0.05）。上述變化可見濃度依賴性。