放射損傷細胞中高爾基體彌散現(xiàn)象及其機制的研究.pdf

1、高爾基體是細胞內(nèi)膜系統(tǒng)中重要的細胞器，參與了細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的加工、分泌和囊泡運輸?shù)冗^程。近年發(fā)現(xiàn)，DNA損傷可以引起高爾基體的重組，使其片段化并分散到整個細胞之中，并認為這種高爾基體結(jié)構(gòu)的變化可能與受照細胞的存活有關(guān)。盡管此研究結(jié)果發(fā)表在著名的“細胞”雜志上，但相關(guān)領(lǐng)域的研究報道到目前為止仍然很少。高爾基體的結(jié)構(gòu)變化是否真正參與了細胞存活反應，或僅僅是細胞放射損傷后亞細胞結(jié)構(gòu)發(fā)生的一種伴隨反應，本文將以此為切入點，探索放射損傷后高爾基體的

2、彌散現(xiàn)象以及對其機制進行探討。
　　目的：
　　通過觀察輻射對高爾基體形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，了解高爾基體彌散的機制以及對彌散效應和生物學意義進行初步探討。
　　方法：
　　采用免疫熒光技術(shù)檢測放射損傷細胞中高爾基體彌散現(xiàn)象并對彌散面積進行統(tǒng)計分析，流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化，克隆形成實驗分析細胞存活率，Western Blot檢測高爾基體蛋 GOLPH3及 DNA斷裂損傷標志物γH2AX的表達，采用RT-PCR檢測輻射

3、細胞后miRNA分子 miR-378e、miR-486-3p表達變化及其靶蛋白GOLPH3L、MYO18A表達變化。
　　結(jié)果：
　　免疫熒光檢測結(jié)果顯示，照射后高爾基體的彌散面積增加，具有一定的劑量效應和時間效應關(guān)系；具有激活 DNA-PKcs的放射損傷防護劑香蘭素衍生物VND3207能夠減輕γ射線對高爾基體的損傷，其表現(xiàn)為與未加藥組相比，VND3207能抑制不同劑量照射后高爾基體彌散面積的增加，同時促進了受照細胞的存活；

4、細胞周期測定結(jié)果顯示，4Gyγ射線照射后G2/M期阻滯峰值出現(xiàn)在12h左右；免疫印跡結(jié)果顯示DNA損傷引起的G2/M期阻滯也在12h后解除；而高爾基體彌散在細胞周期阻滯解除后如照射后24h甚至更長時間仍然存在。
　　RT-PCR結(jié)果顯示，4Gy、10Gy照射后，人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）中miR378e、miR486-3p和GOLPH3L及MYO18A mRNA分子有表達上調(diào)的趨勢，12h趨勢明顯；免疫熒光檢測結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染m

5、iR378e、miR486-3p、siGOLPH3L后的細胞中，高爾基體呈現(xiàn)彌散的趨勢；細胞周期結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 siGOLPH3L、siMYO18A能延長細胞照射后G2/M期的阻滯；同時觀察到，轉(zhuǎn)染miR378e、miR486-3p、siGOLPH3L、siMYO18A后，受照細胞的存活率降低。
　　結(jié)論：
　　1.γ射線照射后，細胞高爾基體出現(xiàn)彌散現(xiàn)象，且具有一定的劑量效應和時間效應。
　　2.高爾基體的彌散現(xiàn)象與細

6、胞周期G2/M期阻滯相關(guān)，但在輻射損傷中的高爾基彌散與周期阻滯沒有因果關(guān)系。
　　3.高爾基體的彌散與細胞所受損傷程度相關(guān)，輻射防藥物VND3207能抑制彌散。
　　4. DNA-PKcs抑制劑NU7441抑制了DNA損傷的修復，也抑制了高爾基體彌散。
　　5.高爾基體蛋白 GOLPH3，在照射后表達下調(diào)，可被 DNA-PKcs敲低抑制下調(diào)。
　　6. miRNA分子miR-378e、miR-486-3p在高爾基