原花青素B2對肝癌細胞HepG2生物學(xué)行為和PI-3K-PTEN-Akt-mTOR通路的影響.pdf

1、 原花青素 B2 對肝癌細胞 HepG2 生物學(xué)行為和 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 通路的影響 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 (學(xué)術(shù)學(xué)位) 學(xué)生姓名：孔祥軍 指導(dǎo)教師：呂鳳林 教 授 專 業(yè)：生物學(xué) 學(xué)科門類：理學(xué) 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 O 一三年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）每年會造成超過 60 萬人的死亡，是全球癌癥引發(fā)死亡的第

2、三大原因。早期肝癌是可以通過肝切除和肝移植手術(shù)等治療手段治愈的，但這只能用于少數(shù)符合要求的患者。不能采用手術(shù)治療的患者必須得忍受長期化學(xué)治療帶來的毒副作用，且復(fù)發(fā)率高。食物中的天然多酚物質(zhì)因其對癌癥有較好的預(yù)防和治療效果，且毒副作用小，成為癌癥防治藥物的研究熱點。原花青素是一類廣泛存在于日常飲食中的天然多酚類化合物，具有高效的抗氧化和防癌作用。但是不同來源的原花青素提取物對腫瘤的作用效果有很大差異，機制也不同，而且不同成分對腫瘤的作用效

3、果尚不清楚。各類原花青素中分布最廣的是二聚體，葡萄籽原花青素 B2（Grape seed procyanidin B2,GSPB2）是葡萄籽提取物的主要成分，在此我們研究不同濃度 GSPB2（純度>98%）對肝癌細胞HepG2 細胞行為學(xué)的作用， 并檢測細胞 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號通路關(guān)鍵分子活性的變化，為原花青素臨床試驗研究提供數(shù)據(jù)及理論支持。 首先分別用 MTT 法、PI 染色、Annexin V-FIT

4、C/PI 染色、Transwell 體外遷移模型以及 Matrigel 體外三維培養(yǎng)模型檢測不同濃度的 GSPB2 對 HepG2 細胞的生存率、細胞周期分布、細胞凋亡作用、細胞遷移能力以及管樣形成能力的影響，實驗結(jié)果顯示隨著濃度的升高 GSPB2 對 HepG2 細胞的生存率抑制效果越明顯(P0.05)。 在不同濃度GSPB2的作用下，HepG2 細胞 G0/G1 期所占比例變化不明顯(P>0.05)，并且 GSPB2 作用24

5、h， 對 HepG2 細胞無明顯誘導(dǎo)細胞凋亡作用(P>0.05)。 隨著 GSPB2 作用濃度的增加，HepG2 細胞的遷移能力和管樣形成能力會先受到明顯抑制繼而這種抑制作用趨于不明顯， 低濃度的 GSPB2 對 HepG2 細胞的遷移能力和管樣形成能力抑制更為明顯。 其次，已知 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號通路是腫瘤生長、發(fā)展和惡化的重要信 號 通 路 。 我 們 用 western blotting 檢 測 到

6、 了 GSPB2 對 HepG2 細 胞PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號通路中關(guān)鍵分子的表達及活性影響，結(jié)果顯示，不同濃度的 GSPB2 對此信號通路中 PI-3K （p110α） 和 p-Akt 的表達以及 PTEN 和 mTOR的磷酸化水平作用不同。 具體結(jié)果是： 低濃度的GSPB2 可以有效抑制 PI-3K （p110α）和 p-Akt 的 表 達、 降 低 PTEN 和 mTOR 的 磷 酸 化 水 平(P>0