RNAi沉默CtBP1基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞株HepG2生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的: 通過觀察siRNA對人肝癌細(xì)胞株HepG2內(nèi)CtBP1基因及其靶基因E-cadherin表達(dá)的影響,和對HepG2細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡及侵襲力的影響,初步探導(dǎo)CtBP1基因在調(diào)節(jié)肝癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。為進(jìn)一步研究肝癌或其他腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制及治療靶基因?qū)ふ业难芯刻峁├碚摶A(chǔ)。
　　方法: 采用X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent為載體介導(dǎo)Control siRNA(Flu

2、orescein Conjugate)-A轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞,在倒置熒光相差顯微鏡下觀察,觀測轉(zhuǎn)染效率。實(shí)驗(yàn)分空白對照組、轉(zhuǎn)染試劑對照組、陰性序列對照組及干擾組,以 X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent為載體介導(dǎo)Control siRNA-A與CtBP1 siRNA(h)轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞,RT-PCR法和Western Blot法分別從核酸水平和蛋白質(zhì)水平檢測CtBP1基因與E-cadher

3、in基因的表達(dá)情況;MTT法檢測HepG2細(xì)胞增殖的情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測HepG2細(xì)胞周期與凋亡的變化;Transwell小室法檢測HepG2細(xì)胞侵襲力的變化。
　　結(jié)果: 觀察到siRNA轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率達(dá)85％以上;與3個(gè)對照組相比,干擾組CtBP1mRNA及CtBP1的表達(dá)水平下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),CtBP1mRNA抑制率達(dá)38.11%,蛋白制率達(dá)62.39%,3個(gè)對照組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P>0.05);與3個(gè)對照組相比,干擾組E-cadherin mRNA及E-cadherin的表達(dá)水平上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),3個(gè)對照組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組細(xì)胞增殖明顯受到抑制,生長抑制率在轉(zhuǎn)染后24、48、72、96h分別平均達(dá)到22.34%,52.15%,53.97%和54.77%,3個(gè)對照組之間細(xì)胞增殖的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);空白對照組、轉(zhuǎn)染試劑對照組、

5、陰性序列對照組及干擾組之間細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞數(shù)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組的細(xì)胞凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對照組之間細(xì)胞凋亡率的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組平均每高倍視野下穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),3個(gè)對照組之間穿膜細(xì)胞數(shù)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論: CtBP1 siRNA(h)已轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞