整合素β1反義寡核苷酸對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞體外增殖的影響.pdf

1、 目的 ：利用整合素 β1 反義脫氧寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)封閉宮頸癌 HeLa細(xì)胞的整合素 β1基因,觀察其對(duì)宮頸癌 HeLa 細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響及HeLa細(xì)胞整合素β1表達(dá)情況,探討整合素β1在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中可能的作用。
方法：
1.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)核苷酸序列轉(zhuǎn)染宮頸癌 HeLa 細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分整合素 β1反義寡核苷酸序列+脂質(zhì)

2、體組(ASODN組)、隨機(jī)寡核苷酸序列+脂質(zhì)體組(RODN組)、脂質(zhì)體組、空白對(duì)照組(HeLa細(xì)胞組)。
2.采用 WST-1法檢測(cè)轉(zhuǎn)染整合素 β1反義寡核苷酸后不同時(shí)間段宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖情況。
3.利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞整合素β1mRNA的表達(dá)。
4.Western blot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞整合素β1蛋白的表達(dá)。
5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)

3、胞凋亡。
6.所得各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x ±s)表示,由 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析(F檢驗(yàn))和t檢驗(yàn),以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)果：
1.反義寡核苷酸(ASODN)轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)即可對(duì)宮頸癌 HeLa 細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制,作用 24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí) ASODN組抑制率分為：26.17%, 39.78%, 45.6%, RODN 組抑制率分別為：7.41%,2

4、.73%,2.58%,脂質(zhì)體組抑制率分別為：4.47%,2.36%,2.21%。由此可見反義寡核苷酸(ASODN)對(duì)宮頸癌 HeLa 細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯抑制作用,且呈時(shí)間依賴性,隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)。
2. 轉(zhuǎn)染整合素β1反義寡核苷酸48小時(shí)可使HeLa細(xì)胞的整合素β1mRNA表達(dá)水平明顯降低,作用48小時(shí)、72小時(shí)ASODN組的整合素 β1mRNA表達(dá)分別為：0.8659±0.0647,0.5950±0.0066,

5、明顯低于 HeLa細(xì)胞組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脂質(zhì)體組和 RODN組分別在相同時(shí)間點(diǎn)與 HeLa細(xì)胞組相比,整合素 β1mRNA表達(dá)水平有降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。ASODN 組在 24 小時(shí)、48 小時(shí)、72 小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)整合素 β1mRNA 表達(dá)分別為 1.367± 0.01221 , 0.9361 ± 0.009 , 0.6981 ± 0.0075 ,結(jié)果表明反義寡核苷酸能特異性封閉整合素β1基因。

6、
3.轉(zhuǎn)染整合素β1反義寡核苷酸72小時(shí)后,宮頸癌HeLa細(xì)胞整合素 β1 蛋白由 1.0900±0.0367 降低為 0.8370±0.0650,與 RODN組、脂質(zhì)體組、HeLa 細(xì)胞組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) , RODN 組、脂質(zhì)體組與 HeLa 細(xì)胞組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
4.轉(zhuǎn)染整合素 β1反義寡核苷酸組 HeLa細(xì)胞 48小時(shí)后其生長(zhǎng)周期被阻滯在 G2/M期,A

7、SODN組、RODN組、脂質(zhì)體組、HeLa細(xì)胞組 G2 期細(xì)胞比率分別為：(32.20±1.8)%,(15.16±0.5)%,(13.80 ±1.0)%,(13.23±0.6)%,ASODN 組與 HeLa 細(xì)胞組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脂質(zhì)體組和RODN組與HeLa空白組相比較,細(xì)胞周期無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
5.ASODN 組細(xì)胞隨著轉(zhuǎn)染后時(shí)間的延長(zhǎng),其凋亡率逐漸增加,相同時(shí)間點(diǎn)